培養幽門螺杆菌的培養基包括非選擇性及選擇性兩種。常用的非選擇性培養基基礎為腦心浸液瓊脂、哥倫比亞瓊脂、胰蛋白腖大豆瓊脂以及Wilkins-Chalgren瓊脂。培養基中需加7%～10%的去纖維蛋白馬血。羊血、人血、馬血清、氯化血紅素、澱粉、膽固醇或環糊精（cyclodextrins） 也可代替馬血。選擇培養基則是在上述 培養基中添加一定的抗菌藥物，如萬古黴素、啶酸、二性黴素B、多粘菌素B以及甲氧苄氨嘧啶（TMP）。常用的有Skirrow 配方及Dent 配方。前者原用於彎曲菌的培養，亦可用於幽門螺杆菌培養。後者為前者的改良，即將多粘菌素用頭孢磺啶取代，因為少數（5%左右）幽門螺杆菌菌株對多粘菌素敏感。Drnt配方為萬古黴素（10mg／L）、頭孢磺啶（5mg／L）、TMP（5mg/L）以及二性黴素B（5mg／L）。有報道指出，部分菌株對啶酸敏感，因而培養基中應盡量避免作用該抗生素。
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