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微生物鑒定中常用的生化反應



錄入時間:2012-8-6 8:15:07 來源:生物穀

有些細菌具有合成澱粉酶的能力,可以分泌胞外澱粉酶。澱粉酶可以使澱粉水解為麥芽糖和葡萄糖,澱粉水解後遇碘不再變藍色。
細菌產生的脂肪酶能分解培養基中的脂肪生成甘油及脂肪酸。脂肪酸可以使培養基pH下降,可通過在油脂培養基中加入中性紅做指示劑進行測試。中性紅指示範圍為pH6.8(紅)~8.0(黃)。當細菌分解脂肪產生脂肪酸時,則菌落周圍培養基中出現紅色斑點。
某些細菌分泌蛋白酶分解明膠,產生小分子物質。如果細菌具有分解明膠的能力,則培養基可由原來固體狀態變成液體狀態。
牛乳中主要含有乳糖、酪蛋白等成分。細菌對牛乳的利用主要是指對乳糖及酪蛋白的分解和利用。牛乳中常加入石蕊作為酸堿指示劑和氧化還原指示劑。石蕊中性時呈淡紫色,酸性時呈紅色,堿性時呈藍色,還原時則部分或全部脫色。細菌對牛乳的利用可分三種情況:
(1)酸凝固作用:細菌發酵乳糖後,產生許多酸,使石蕊牛乳變紅,當酸度很高時,可使牛乳凝固,此稱為酸凝固。
(2)凝乳酶凝固作用:某些細菌能分泌凝乳酶,使牛乳中的酪蛋白凝固,這種凝固在中性環境中發生。通常這種細菌還具有水解蛋白質的能力,因而產生氨等堿性物質,使石蕊變藍。
(3)腖化作用:酪蛋白被水解,使牛乳變成清亮透明的液體。腖化作用可以在酸性條件下或堿性條件下進行,一般石蕊色素被還原褪色。
實驗材料
1、活材料:大腸杆菌(E. coli)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、產氣腸杆菌(Enterobacter aerogenes)、黏乳產堿杆菌(Alcaligenes viscolactis)、銅綠假單胞菌(Psudomonas aeruginosa)、普通變形杆菌(Proteus vularis )。
2、培養基:澱粉培養基:牛肉膏蛋白腖培養基加0.2%的可溶性澱粉;油脂培養基:牛肉膏蛋白腖培養基加花生油10mL、0.6%中性紅水溶液1mL;明膠液化培養基:蛋白腖5g,明膠100~150g,水1000mL, pH7.2~7.4,115℃滅菌20min。石蕊牛乳培養基:牛奶粉100g、石蕊0.075g、水1000 mL、pH6.8,121℃滅菌15 min 。
3、試劑:盧哥氏碘液。
實驗用品
平皿、接種環、酒精燈、試管、接種針等。
實驗方法
(一)澱粉水解試驗
1、準備澱粉培養基平板:將熔化後冷卻至50℃左右的澱粉培養基倒入無菌平皿中,待凝固後製成平板。
2、接種:用記號筆在平板底部劃成兩部分,在每部分分別寫上菌名,用接種環取少量的待測菌,點接在培養基表麵的相對應部分的中心,其中一個菌種應是枯草杆菌做對照菌。★你能解釋原因嗎?
3、培養:將接種後的平皿置於28℃恒溫箱培養24h。
4、檢測:取出平板,打開平皿蓋,滴加少量的碘液於平板上,輕輕旋轉,使碘液均勻鋪滿整個平板。菌落周圍如出現無色透明圈,則說明澱粉已經被水解,表示該細菌具有分解澱粉的能力。可以用透明圈大小說明測試菌株水解澱粉能力的強弱。
(二)油脂水解試驗
1、將裝有油脂培養基的三角瓶置於沸水浴中熔化,取出並充分振蕩,使油脂均勻分布,再傾入無菌平皿中,待凝固成平板。
2、接種:於同一平皿的兩邊接種,其中一種是金黃色葡萄球菌作為對照菌。置於37℃恒溫箱培養24h,取出後觀察平板菌苔顏色,如果出現紅色斑點,即說明脂肪被水解了,此反應為正反應。紅色斑點大小說明測試菌株水解脂肪能力的強弱。
(三)明膠液化試驗
1、接種:用穿刺接種法接種大腸杆菌或產氣腸杆菌於明膠培養基中。
2、培養:放20℃恒溫箱中培養48h。若細菌在20℃下不長,則應放在最適溫度下培養。
3、觀察結果:觀察培養基有無液化情況及液化後的形狀。
因明膠在低於20℃時凝固,高於25℃時自行液化,若是在高於20℃下培養的細菌,觀察時應放在冰浴中觀察,若明膠被細菌液化,即使在低溫下明膠也不會再凝固。
(四)石蕊牛乳試驗
1、接種:將黏乳產堿杆菌和銅綠假單胞菌接種入石蕊牛乳培養基中。
2、培養:將接種後的試管於37℃恒溫培養7d,另外保留一支不接種的石蕊牛乳培養基作為對照。
3、結果觀察:取出培養物,以不接種任何細菌的試管為對照,觀察接種不同細菌生長後的變化情況。

 

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