1 主題內容與適用範圍
本標準規定了食品中溶血性鏈球菌的檢驗方法。
本標準適用於食品和食物中毒樣品中溶血性鏈球的檢驗。
2 引用標準
GB 4789.28 食品衛生微生物學檢驗 染色法、培養基和試劑
3 設備和材料
3．1 溫箱：36±1℃。
3．2 水浴：36±1℃。
3．3 顯微鏡。
3．4 離心機。
3．5 試管架。
3．6 滅菌平皿。
3．7 滅菌小試管。
3．8 載玻片。
3．9 滅菌吸管：1 mL、10 mL。
3．10 滅菌鑷子。
3．11 均質器。
3．12 酒精燈。
3．13 接種環。
4 培養基和試劑
4．1 葡萄糖肉浸液肉湯：按GB 4789.28 中 4.1 規定，在肉浸液肉湯內加入1%
葡萄糖。
4．2 肉浸液肉湯：按 GB 4789.28 中 4.1 規定。
4．3 匹克氏肉湯：按 GB 4789.28 中 4.62 規定。
4．4 血瓊脂平板：按 GB 4789.28 中 4.6 規定。
4．5 人血漿。
4．6 0.25%氯化鈣。
4．7 滅菌生理鹽水。
4．8 杆菌肽藥敏紙片（含 0.04 單位） 。
5 檢驗程序
6 操作步驟
6．1 樣品處理
稱取 25 g 固體檢樣；稱取 25 mL 液體檢樣，加入 225 mL 滅菌生理鹽水，
研成勻漿製成混懸液。
6．2 一般培養
將上述混懸液吸取 5 mL，接種於 50 mL 葡萄糖肉浸液肉湯；或直接劃線接
種於血平板，如檢樣汙染嚴重，可同時按上述量接種匹克氏肉湯，經 36±1℃培
養 24 h，挑起乙型溶血圓形突起的細小菌落，在血平板上分純，然後觀察溶血
情況及革蘭氏染色，並進行鏈激酶試驗及杆菌肽敏感試驗。
6．3 形態與染色
本菌呈球形或卵圓形，直徑0.5～1 µm，鏈狀排列，鏈長短不一，短者4～8
個細胞組成，長者 20～30 個，鏈的長短常與細菌的種類及生長環境有關；液體
培養中易呈長鏈；在固體培養基中常呈短鏈，不形成芽孢，無鞭毛，不能運動。
6．4 培養特性
該菌營養要求較高，在普通培養基上生長不良，在加有血液、血清培養基中
生長較好。溶血性鏈球菌在血清肉湯中生長時管底呈絮狀或顆粒狀沉澱。血平板
上菌落為灰白色，半透明或不透明，表麵光滑，有乳光，直徑約0.5～0.75 mm，
為圓形突起的細小菌落，乙型溶血鏈球菌周圍有 2～4 mm 界限分明、無色透明的
溶血圈。
6．5 鏈激酶試驗
致病性乙型溶血性鏈球菌能產生鏈激酶（即溶纖維蛋白酶） ，此酶能激活正
常人體血液中的血漿蛋白酶原，使成血漿蛋白酶，而後溶解纖維蛋白。
吸取草酸鉀血漿 0.2 mL，加0.8 mL 滅菌生理鹽水，混勻，再加入 18～24 h36
±1℃培養的鏈球菌培養物 0.5 mL 及 0.25%氯化鈣 0.25 mL（如氯化鈣已潮解，
可適當加大至 0.3%～0.35%） ，振蕩搖勻，置於 36±1℃水浴中 10 min，血漿混
合物自行凝固（凝固程序至試管倒置，內容物不流動） 。然後觀察凝塊重新完全
溶解的時間，完全溶解為陽性，如 24 h 後不溶解即為陰性。
草酸鉀人血漿配製：草酸鉀0.01 g 放入滅菌小試管中，再加入5 mL人血，
混勻，經離心沉澱，吸取上清液即為草酸鉀人血漿。
6．6 杆菌肽敏感試驗
挑取乙型溶血性鏈球菌液， 塗布於血平板上， 用滅菌鑷子夾取每片含有 0.04
單位的杆菌肽紙片，放於上述平板上，於 36±1℃培養 18～24 h，如有抑菌帶出
現即為陽性。同時用已知陽性菌株作為對照。
附加說明：
本標準由衛生部衛生監督司提出。
本標準由北京市衛生防疫站負責起草。
本標準主要起草人劉以賢。
本標準由衛生部委托技術歸口單位衛生部食品衛生監督檢驗所負責解釋。
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