動物細胞融合

 

細胞融合是指兩個或兩個以上的細胞合並成為一個細胞的過程。在自然情況下，體內和體外培養的細胞均能發生自發融合現象。人工方法誘導細胞融合開始於50 年，現在這項技術已成為研究細胞遺傳、細胞免疫，腫瘤及細胞工程的重要手段。在誘導物（如仙台病毒，聚乙二醇）作用下，相互融合的細胞發生凝集，隨後在質膜接觸處發生質膜成份的一係列變化，主要是某些化學鍵的斷裂與重排，最後打通兩質膜，形成雙核或多核細胞（此時稱同核體或異核體）。通過有絲分裂，細胞核便發生融合，形成雜種細胞。

 

實驗內容及方法

1. 用注射器取2ml Alsver 液，再從翼下靜脈取雞血2ml，注入試管內，再加6ml Alsver 液，混勻後置4℃冰箱中可備作3—4 天用。

2. 實驗時取“1”液1ml 於離心管中，加入4ml 0.85%的NaCl 液，混勻平衡後以1200r/min離心5 分鍾。

3. 去上清液。再重複“2”兩次，最後一次離心10 分鍾。

4. 在沉降血球中加入1mlGKN 液，混勻使之成為細胞懸液。（可加GKN 液調節稀釋使每立方毫米含紅細胞3~4 萬個）。

5. 在“4”液中加入6—8 滴（約0.5ml）50%的PEG 液，迅速混勻，常溫下2~3min 滴片鏡檢。觀察時注意不同程度的融合現象。通常分為五個階段。①兩細胞膜接觸，粘連；②細胞膜形成穿孔；③兩細胞的細胞質連通；④通道擴大，兩細胞連成一體；⑤細胞完全合並，形成一個含有兩個或多個核的圓形細胞。

6. 計算融合率。

 

實驗用品

1. 器具 顯微鏡 離心機 天平 離心管 注射器 細滴管 載片、蓋片

2. 試劑 50%聚乙二醇（PEG）：稱取一定量的PEG（MW=4000）放入刻度試管，在酒精燈火或沸水中加熱溶化。待冷至50℃時，加入等體積並預熱至50℃的GKN 液混勻。

Alsver 液：葡萄糖2.05g 檸檬酸鈉0.8g NaCl 0.42g，加重蒸水至100ml。

GKN 液：NaCl 8g，KCl 0.4g，Na2HPO4·2H2O 1.77g，NaH2PO·2H2O 0.69g，葡萄糖2g，酚紅0.01g，溶於1000ml 重蒸水中。

0.85%NaCl 液

3. 材料 一齡公雞靜脈血