1、原理： 細菌分解葡萄糖產生丙酮酸後，由於代謝的途徑不同，有的細菌可使丙酮酸轉化生成乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物，使培養基pH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅色，為甲基紅試驗陽性 ；有的細菌使丙酮酸脫羧後形成酮、醇類中性產物，培養液pH＞5.4，甲基紅指示劑呈桔黃色，為甲基紅試驗陰性。
2、試驗方法：挑取新鮮的待試培養物少許，接種於磷酸鹽葡萄糖蛋白腖水培養基，於36±1 ℃或30 ℃（以30 ℃較好）培養3~5天，從第48h起，每日取培養液1mL，加入甲基紅指示劑1~2滴，立即觀察結果。 3、結果觀察與記錄
（1）呈鮮紅色或橘紅色為陽性，呈淡紅色為弱陽性，記MR +；
（2）呈橘黃色或黃色為陰性， 記MR -，迄至發現陰性並培養至第5天仍為陰性，即可判定結果。
應用：主要用於大腸埃希菌（陽性）和產氣腸杆菌（陰性）的鑒別。
• 腸杆菌中許多細菌甲基紅試驗為陽性，如沙門菌、誌賀菌、枸櫞酸杆菌、變形杆菌等為陽性，但腸杆菌屬和克雷伯菌屬為陰性。
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