革蘭氏染色法是1884年由丹麥病理學家C.Gram所創立的。革蘭氏染色法可將所有的細菌區分為革蘭氏陽性菌（G+）和革蘭氏陰性菌（G—）兩大類，是細菌學上最常用的鑒別染色法。
該染色法所以能將細菌分為G+菌和G—菌，是由這兩類菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。G—菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質，而且肽聚糖層較薄、交聯度低，故用乙醇或丙酮脫色時溶解了類脂質，增加了細胞壁的通透性，使初染的結晶紫和碘的複合物易於滲出，結果細菌就被脫色，再經蕃紅複染後就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯度高，類脂質含量少，經脫色劑處理後反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細菌仍保留初染時的顏色
步驟：
（1）塗片：塗片方法與簡單染色塗片相同。
（2）晾幹：與簡單染色法相同。
（3）固定，與簡單染色法相同
（4）結晶紫色染色：將玻片置於廢液缸玻片擱架上，加適量（以蓋滿細菌塗麵）的結晶紫染色液染色1分鍾。
（5）水洗：傾去染色液，用水小心地衝洗。
（6）媒染：滴加盧哥氏碘液，媒染1min。
（7）水洗：用水洗去碘液。
（8）脫色：將玻片傾斜，連續滴加95%乙醇脫色20—25s至流出液無色，立即水洗。
（9）複染：滴加蕃紅複染5min。
（10）水洗：用水洗去塗片上的蕃紅染色液。
（11）晾幹：將染好的塗片放空氣中晾幹或者用吸水紙吸幹。
（12）鏡檢：鏡檢時先用低倍，再用高倍，最後用油鏡觀察，並判斷菌體的革蘭氏染色反應性。
（13）實驗完畢後的處理：
①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭幹淨，a.先用擦鏡紙將油鏡頭上的油擦去。b.用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭擦2—3次。c.再用幹淨的擦鏡紙將鏡頭擦2—3次。注意擦鏡頭時向一個方向擦拭。
②看後的染色玻片用廢紙將香柏油擦幹
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