指通過利用生物化學的方法來測定微生物的代謝產物、代謝方式和條件等來鑒別細菌的類別、屬種的試驗。
生化試驗或稱生化反應：細菌的酶不完全相同，對營養物質的分解能力不一致，因此其代謝產物各異。在培養基中加入可與被測終產物反應的指示劑，產生肉眼可見的變化，如顏色的改變等，利用生化方法來鑒定細菌的試驗，統稱為細菌的生化試驗或稱生化反應 （二）生化試驗的方法：
1在培養物中加入某種底物與指示劑,經接種、培養後,觀察培養基的pH值變化。 2在培養物中加入試劑，觀察它們同細菌代謝產物所生成的顏色反應。 3根據酶作用的反應特性，測定酶的存在。
4根據細菌對理化條件和藥品的敏感性，觀察細菌的生長情況。 （三）生化試驗的注意事項
1. 待檢菌應是新鮮培養物，培養18~24h。 2. 待檢菌應是純種培養物。
3. 遵守觀察反應的時間。觀察結果的時間，多為24或48小時。 4. 應做必要的對照試驗。
5. 提高陽性檢出率，至少挑取2~3待檢的疑似菌落分別進行試驗。 （四） 檢驗細菌的生化試驗範圍
:1、糖（醇）類代謝試驗 2、氨基酸和蛋白質代謝試驗
3、有機酸鹽和銨鹽的利用試驗 4、呼吸酶類試驗 5、毒性酶類試驗
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