細菌能否利用某些含碳化合物作為唯一碳源，反映該菌是否產生代謝這種化合物的有關酶係，因而作為鑒定依據。測定的基礎培養基配方很多，因種而異。現介紹1種合成的基礎培養基，有些細菌還可適當補加各種維生素。培養基可製成液體，分裝試管，也可製成固體平板。可用於測定的底物種類很多，有單糖、雙糖、糖醇、脂肪酸、羥基酸及其他有機酸、醇、各種氨基酸類胺類以及碳氫化合物等。糖的含量一般為1％，醇類酚類等的含量一般為0.1－0.2％，氨基酸的含量一般為0.5％。因碳氫化合物不溶於水，可在液體培養基中振蕩培養，或加入到45℃的固體培養基中，振蕩後立即倒成平板。有些底物不宜用高壓滅菌，可用過濾法滅菌後加入已滅菌的基礎培養基中，某些醇類和酚類不必滅菌。
接種和觀察結果：菌種最好做成懸液，避免帶入少量碳源幹擾試驗結果。平板培養用接種環點種，液體培養則用直針接種。每一測定菌必須接種未加碳水化合物的空白基礎培養基作對照。
適溫培養2、5、7天後觀察，凡測定菌在有碳水化合物的培養基中生長情況，明顯超過空白培養基的生長量為陽性，否則為陰性。假若兩種培養基上生長情況差別不明顯，開在同一培養基上連續移種3次，如差別仍不明顯則以陰性論。
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