致瀉大腸埃希菌檢驗
錄入時間:2013-11-26 11:08:13
來源：betway必威西汉姆联生物
一、增 菌
樣品采集後應盡快檢驗。除了易腐食品在檢驗之前應預冷藏外，一般不冷藏。
以無菌手續稱取檢樣25g，加在225ml營養肉湯中，以均質器打碎1分鍾或用乳缽加滅菌砂磨碎。
取出適量，接種乳糖膽鹽培養基（測大腸菌群的培養基），以測定大腸菌群MPN，其餘的移人500ml廣口瓶內，於36℃土1℃培養6小時。 挑取l環，接種於1管30ml腸道菌增菌肉湯內，於42℃培養18小時。 二、分 離
將乳糖發酵陽性的乳糖膽鹽發酵管和增菌液分別劃線接種麥康凱或伊紅美藍瓊脂平板；汙染嚴重的檢樣，可將檢樣勻液直接劃線接種麥康凱
或伊紅美藍平板，於36℃±1℃培養18～24小時，觀察菌落。不但要注意乳糖發酵的菌落，同時也要注意乳糖不發酵和遲緩發酵的菌落。
三、生化試驗
1、自鑒別平板上直接挑取數個菌落分別接種三糖鐵瓊脂(TSI)或克氏雙糖鐵瓊脂(KI)。
同時將這些培養物分別接種蛋白腖水、半固體、pH7．2尿素瓊脂、KCN肉湯和賴氨酸脫羧酶試驗培養基。以上培養物均在36℃培養過夜。 2．TSI（三糖鐵瓊脂）斜麵產酸或不產酸，底層產酸，H2S陰性，KCN陰性和尿素陰性的培養物為大腸埃希菌。
TSI（三糖鐵瓊脂）底層不產酸，或H2S、KCN、尿素有任意一項為陽性的培養物，均非大腸埃希菌。必要時做氧化酶試驗和革蘭染色。
四、血清學試驗
1、假定試驗 挑取經生化試驗證實為大腸埃希菌的瓊脂培養物，
用◇
1致病性大腸埃希菌、◇2侵襲性大腸埃希菌和◇3產腸毒素大腸埃希菌多價O血清和◇4出血性大腸埃希菌O157血清做玻片凝集試驗。 當與某一種多價O血清凝集時，再與該多價血清所包含的單價O血清作試驗。如與某一個單價O血清呈現強凝集反應，即為假定試驗陽性。 2、證實試驗 製備O抗原懸液，稀釋至與Mac Farland3號比濁管相當的濃度。
原效價為1：160～1：320的O血清，用0.5％鹽水稀釋至1：40。稀釋血清與抗原懸液在10mm×75mm試管內等量混合，作單管凝集試驗。 混勻後放於50℃水浴箱內，經16小時後觀察結果。如出現凝集，可證實為該O抗原。
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