傾倒平皿法

 選用適當的培養基並在適當的培養條件下時以對樣品中的活菌或菌落（如菌落形成 單位)計數。水溶性或可在水中製成懸浮液的®體樣品（如土樣、麵粉、奶粉、糖），可以在 稱取樣品後，加入無菌水配製成稀釋液，並按以下介紹的方法計數;有些固體物質(包括一些食品，如奶酪、肉等)需要在無菌水中浸泡後得到懸浮液一般使用的稀釋 液包括蛋白腖水稀釋液，蛋白腖鹽稀釋液和25%的Ringer氏溶液。

在平皿屮加人已知量的懸浮液或其稀釋液，倒入融化的瓊脂。瓊脂凝固置於溫箱中培養後計數。應該選擇平板菌落數小於300的平板計數。需要時可以采用雙平行或三平 行平板。

下麵介紹關丁液體樣品的標準計數方法。對於不同的物質或產品，操作步驟有所不同。

樣品的混合

在進一步檢測前，必須將樣品充分混勻。對於液體樣品，如果瓶中的液體沒有完全充滿，可以在30cm的範圍內振動瓶子25次混勻。如果樣品的瓶子是滿的，快速將瓶子翻 轉M次徹底浞勻,然後倒出約1/4的內容物，再按上述方法搖動25次。

稀釋液的製備

(1)       取一支lmL的吹吸移液管T將移液管的尖部垂直插人樣品液麵下不到3cm的位 置，采用安全移液方式，吸取到lmL刻度後吹掉，反複1U次。吸取lniL液體，移液管尖 貼仵瓶頸，使管外壁的液體流下。將移液管置於第一管稀釋液中，移液管尖部靠在試管內壁，稀釋液液麵以h 2〜處，讓移液管中的液體流出，移液管不能接觸稀釋液，將移液管靜置知，使殘餘的液滴全部流出，並用吹吸球輕輕吹出管內液體。用完的移液管放入 裝有滅菌液的容器中^第一個試管標記為1/10或1CT、

(2)       取一隻新的移液管，放人第一個稀釋度的試管屮，吸取到約lmL的刻度後放出， 反複吹吸10次使內容物混勻(或在手中轉動試管）。試管的尖部不要低於液麵2〜3cm。 然後移取丨mL稀釋液到第二管稀釋液中，如上所述，使移液管中液體流出。同樣，如上步 所述，移液管放人裝有滅闌液的容器屮。並標記稀釋試管為1/】00或10_2。

(3)       取另一隻新的吸管和稀釋管，采用同樣的方法稀釋到1/1000或10人

(4)       根據預測樣品中可能存在的細菌數，采用相同的操作步驟可以進一步稀釋到 10 4、川_5等需要的稀釋度。假定按多數細菌的體積大於l^m3計箅，則細菌團的計數不 可能大於1012/mL。腐敗的肉類表麵的細菌數約為lOVcm2，河水的細菌數約為104〜 106/mL。

平板的製備

(2)                                         使用同一支吸管從10 2稀釋度的試管中吸取lmL稀釋液移取到平板中，注意 在移取前先吹吸液體3次清洗移液管內部並將稀釋液混勻。

(3)                               同樣的方法從10     —和原液中移取lmL液體到平皿中：

(4)       另外一種更快的方法是在稀釋的同時移取溶液。即通過吹吸10次將液體混勻 後，移取lmL液體到平皿中，然後再移取lmL到另一個有稀釋液的試管中。

倒平板

(1)   每個平板中加人10mL融化的瓊脂培養基並迅速往複搖動和轉圈晃動5〜l(hs 使培養基與接種物充分混合。嚴格的操作方法是往複搖動5次，順時針轉動5次，與第一 次運動方叼垂直搖動5次，逆時針轉動5次。用這種方法能保證樣品充分分散，操作時注 意不要讓瓊脂濺到平皿的蓋上。

注意：從稀釋樣品至倒培養基的時間不能超過30min(—般為15〜30min)，因為長時 問放置可能會造成稀釋液中懸浮的細菌死亡、增長或菌落的分離。

(2)   待平板冷卻,翻轉後置於適當的溫度培養。注意平皿的標識必須正確。花點時 間研究如何標識平皿很有必要。使用代碼標識可以避免混淆，但過多的書寫標記會浪費時間，可以使用不同顏色的記號筆以減少e錄。為r盡快達到溫度平衡,在培養箱屮疊放 的平板不能起過六個。

注意：在整個操作過程中要避免汙染。移液管使用前快速通過酒精燈外焰灼燒；樣 品瓶或試管在拿掉塞子及重新蓋上前，都要將W部在火焰上灼燒；平皿蓋開口盡量小，隻 要能倒人培養基即可；倒瓊脂培養基前，將瓶壁或試管壁擦幹；拿掉塞子後（或在再次蓋上 瓶塞之前)要灼燒瓶頸部。

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