①在不含抗生素的奶中按所需濃度加人青黴素溶液，使對照中抗生素濃度與測試的 檢出限製水平一致。以此作為對照管兄外，檢出限還取決於所用菌株的敏感性。使用 枯草芽孢杆菌時，對照管中培養基青黴素的含量為0.05單位/mL;使用嗜熱脂昉芽孢杆 菌(熱乳芽孢杆菌)吋，育黴素含量為0.02單位/mL,
②在40~50℃吋，將lmL處於指數生長期的營養肉湯培養物加人5mL熔化的營養 瓊脂培養基中，然後倒人培養皿,置於橾作台上使之凝固，按要求標記底板。
③使用潔淨幹燥的鑷子，將一片無菌空白抗生素紙片(直徑13mm，Difco)浸入充分 混合的樣品中，控掉多餘奶液，將紙片放在平板中合適的位置，衝洗，擦幹鑷子，進行對照 和其他樣品的測試。
④將平皿置於適當的培養溫度（30℃培養枯草芽孢杆菌或50℃培養嗜熱脂肪芽孢 杆菌）.直到生出菌落或培養至規定的時間。
⑤檢查平板，將樣品的抑菌圏直徑與對照進行比較，當樣品的抑菌圈直徑小於對照 時,樣品合袼；當樣品的抑菌圈直徑等於或大於對照抑菌圏直徑吋，且經內酰胺酶處 理後樣品的抑菌圈直徑小於未用β-內酰胺酶處理的樣品抑菌圏直徑時，樣品中含有 內酰胺類抗生素。當樣品抑菌圏等於或大於對照時,用內酰胺處理後樣品抑菌圏的 大小不變,則應將樣品加熱，破壞樣品中的其他抑製物質，然後再次檢測(或將未經加熱和 加熱的樣品同時檢測）。若樣品中抑製物濃度等於或大於對照濃度時，試驗失敗。
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