用於GB4789.28-2013標準
培養基的實驗室製備
—般要求
正確製備培養基是微生物檢驗的最基礎步驟之一，使用脫水培養基和其他成分，尤其是含有有毒 物質（如膽鹽或其他選擇劑）的成分時，應遵守良好實驗室規範和生產廠商提供的使用說明。培養基 的不正確製備會導致培養基出現質量問題。
使用商品化脫水合成培養基製備培養基時，應嚴格按照廠商提供的使用說明配製。如重量（體積）、 pH 製備日期、滅菌條件和操作步驟等。
實驗室使用各種基礎成分製備培養基時，應按照配方準確配製，並記錄相關信息，如：培養基名 稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、製造商、批號、pH、培養基體積（分裝體積）、無菌措施 (包括實施的方式、溫度及時間）、配置日期、人員等，以便溯源。
水
實驗用水的電導率在25℃時不應超過25μS/cm(相當於電阻率>0.4 MΩcm)，除非另有規定要求。 水的微生物汙染不應超過103 CFU/mL應按GB 4789.2，采用平板計數瓊脂培養基，在36℃±1℃ 培養48 h±2 h進行定期檢查微生物汙染。
稱重和溶解
小心稱量所需量的脫水合成培養基（必要時佩戴口罩或在通風櫃中操作，以防吸入含有有毒物質 的培養基粉末），先加入適量的水，充分混合（注意避免培養基結塊），然後加水至所需的量後適當 加熱，並重複或連續攪拌使其快速分散，必要時應完全溶解。含瓊脂的培養基在加熱前應浸泡幾分鍾。
pH的測定和調整
用pH計測pH，必要時在滅菌前進行調整，除特殊說明外，培養基滅菌後冷卻至25℃時，pH應在 標準pH±0.2範圍內。一般使用濃度約為40 g/L (約1 mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5 g/L (約1 mol/L)的鹽酸溶液調整培養基的pH如需滅菌後進行調整，則使用滅菌或除菌的溶液。
分裝
將配好的培養基分裝到適當的容器中，容器的體積應比培養基體積最少大20%3.3.6 滅菌
—般要求
培養基應采用濕熱滅菌法或過濾除菌法
某些培養基不能或不需要高壓滅菌，可采用煮沸滅菌，如SC肉湯等特定的培養基中含有對光和熱 敏感的物質，煮沸後應迅速冷卻，避光保存；有些試劑則不需滅菌，可直接使用（參見相關標準或供 應商使用說明）。
濕熱滅菌
濕熱滅菌在高壓鍋或培養基製備器中進行，高壓滅菌一般采用121℃±3℃滅菌15 min，具體培養 基按食品微生物學檢驗標準中的規定進行滅菌。培養基體積不應超過1000 mL，否則滅菌時可能會造 成過度加熱。所有的操作應按照標準或使用說明的規定進行。
滅菌效果的控製是關鍵問題。加熱後采用適當的方式冷卻，以防加熱過度。這對於大容量和敏感 培養基十分重要，例如含有煌綠的培養基。
過濾除菌
過濾除菌可在真空或加壓的條件下進行。使用孔徑為0.2 μm的無菌設備和濾膜。消毒過濾設備的 各個部分或使用預先消毒的設備。一些濾膜上附著有蛋白質或其他物質（如抗生素），為了達到有效 過濾，應事先將濾膜用無菌水潤濕。
檢查
應對經濕熱滅菌或過濾除菌的培養基進行檢查，尤其要對pH色澤、滅菌效果和均勻度等指標進 行檢查。
添加成分的製備
製備含有有毒物質的添加成分（尤其是抗生素）時應小心操作（必要時在通風櫃中操作），避免 因粉塵的擴散造成實驗人員過敏或發生其他不良反應；製備溶液時應按產品使用說明操作。
不要使用過期的添加劑；抗生素工作溶液應現用現配；批量配製的抗生素溶液可分裝後冷凍貯存， 但解凍後的貯存溶液不能再次冷凍；廠商應提供冷凍對抗生素活性影響的有關資料，也可由使用者自 行測定。
培養基的使用
瓊脂培養基的融化
將培養基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法（如高壓鍋中的層流蒸汽）使之融化。經過高壓 的培養基應盡量減少重新加熱時間，融化後避免過度加熱。融化後應短暫置於室溫中（如2 min)以避 免玻璃瓶破碎。
融化後的培養基放入47℃~50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫(可根據實際培養基凝固溫度適當提高 水浴鍋溫度)，直至使用，培養基達到47~50℃的時間與培養基的品種、體積、數量有關。融化後的 培養基應盡快使用，放置時間一般不應超過4h未用完的培養基不能重新凝固留待下次使用。敏感的 培養基尤應注意，融化後保溫時間應盡量縮短，如有特定要求可參考指定的標準。 傾注到樣品中的培養基溫度應控製在約45℃左右。
培養基的脫氧
必要時，將培養基在使用前放到沸水浴或蒸汽浴中加熱15 min；加熱時鬆開容器的蓋子；加熱後 蓋緊，並迅速冷卻至使用溫度（如FT培養基）。
添加成分的加入
對熱不穩定的添加成分應在培養基冷卻至47~50℃時再加入。無菌的添加成分在加入前應先放 置到室溫，避免冷的液體造成瓊脂凝結或形成片狀物。將加入添加成分的培養基緩慢充分混勻，盡快 分裝到待用的容器中。
平板的製備和儲存
傾注融化的培養基到平皿中，使之在平皿中形成厚度至少為3 mm (直徑90 mm的平皿，通常要加 入18 mL〜20 mL瓊脂培養基）。將平皿蓋好皿蓋後放到水平平麵使瓊脂冷卻凝固。如果平板需儲存， 或者培養時間超過48 h或培養溫度高於40℃，則需要傾注更多的培養基。凝固後的培養基應立即使用 或存放於暗處和（或）5±3℃冰箱的密封袋中，以防止培養基成分的改變。在平板底部或側邊做好 標記，標記的內容包括名稱、製備日期和（或）有效期。也可使用適宜的培養基編碼係統進行標記。
將倒好的平板放在密封的袋子中冷藏保存可延長儲存期限。為了避免冷凝水的產生，平板應冷卻 後再裝入袋中。儲存前不要對培養基表麵進行幹燥處理。
對於采用表麵接種形式培養的固體培養基，應先對瓊脂表麵進行幹燥：揭開平皿蓋，將平板倒扣 於烘箱或培養箱中（溫度設為25~50℃)；或放在有對流的無菌淨化台中，直到培養基表麵的水滴 消失為止。注意不要過度幹燥。商品化的平板瓊脂培養基應按照廠商提供的說明使用。
培養基的棄置
所有汙染和未使用的培養基的棄置應采用安全的方式，並且要符合相關法律法規的規定。
