所存微生物都受到其生存環境中pH的影響通常，選擇性物質的存在會縮小它們 生長的pH範圍。有時，培養基的酸度或堿度也能作為一種生長選擇因子。而對於生化 測試培養基，微生物在基質中顯tk活性的pH的範圍比生長所耑的PH範圍窄：因此，將 培養基的PH調至預期的範圍內是很蓽要的。當實驗室根據培養基成分自己配製培養基 時，必須檢測並調整pH必須指出的是，即使是生產廠商提供的現成的合成脫水培養基 (尤其是對一些庫存的脫水培養基），在製成實驗用培養基後也需要對其最終PH進行測定。 測定培養基pH的最準確的方法是使用pH計。使用前必須用已知pH的（通常PH 為4~7)標準緩衝溶液進行校準。將pH計的電極用蒸餾水衝洗後浸入到燒杯的培養基 中，就可以從pH汁的刻度讀出培養基的pH。每個生產廠商對每種不同pH計都提供有 詳細的操作說明。
配製培養基時，使用帶機械攪拌的pH計可以很容易地調整pH
培養基應在能夠不停攪拌的荇器(如大燒杯）中配製，最好使用磁力攪拌器，磁力攪拌器帶有聚乙烯或聚四氟乙烯包裝的磁棒。含瓊脂的培養基需在融化後調整其pH，用可加 熱的磁力攪拃器很容易辦到。調節pH時用巳知pH的標準緩衝液溶液先對pH計迸行 校準。然後將複合電極和電阻溫度計(如果有)置於培養基中，從燒杯遠離電極的一端緩 慢加入適量的鹽酸和氫氧化鈉，直到培養基達到並保持所需的pH。
PH計的溫度補償應考慮到溫度對電極係統的影響：在一些稀釋液和培養基中，PH 隨溫度的變化而有相當大的變化。對於液體培養基和稀釋液而言，pH通常既可以在25℃下,也可以在其使用時的溫度下調整和測定。
瓊脂培養基必須在溶解後進行PH的調整，溶解的溫度在45℃以上：因此，固體培養 基應在其使用溫度確定pH這時應使用平頭的複合電極，同吋用手動校準PII計的溫度 補償。在製備培養基時，若測定出培養基在熔化狀態和凝固狀態的pH有所不同時，說明 在調整pH時產生誤差。
同樣,製備的培養基在加熱滅菌處理(如高壓滅菌)時，也可能會產生PH的變化。對 於脫水培養某，生產廠商己考慮到這一點，通常不需要再調整其pH。但應認真核對待用 培養基的pH如果脫水的瓊脂培養基在再次溶解或製備的過程中必須調整pH，那麽最 好在滅菌操作步驟之後用過濾滅菌的鹽酸和氫氧化鈉溶液進行調整，以避免造成因再次 滅菌而形成的培養基的過度加熱。當用不同的原料或藥品製備培養基時，必須在高壓滅 菌後檢測培養基的pH。此外，如果發現培養基的pH在每次高壓滅菌後都發生相同變 化，可在配製培養基時對pH進行適當調整。但仍需測定培養基滅菌後的最終pH。
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