熒光顯微鏡
熒光是由一定波長的光被特定物質吸收後,發射出 另一種具有較長波長的光而產生 的一種現象。這種能重新發射光的物質稱為熒光團。一些天然的生物物質(如葉綠素)都 有熒光現象,被稱為自發熒光。用於微生物顯微鏡觀察的樣品常用熒光染色物質(或稱為 “熒光染料”)染色。使用特殊的波長轉換裝置,可以在熒光染料被紫外光照射吋,發出可 見光譜範圍內的光。這類染料有吖啶橙、熒光素異硫氰酸鹽和酸性品紅等。熒光燃料被 激發後發射的光顯示特殊的波峰值。吖啶橙是一種異染性染料,是單體熒光綠(波長約 525nm)和熒光紅染料分子結合後的產物。這種產物遇到RNA時染料之 間發生交互作用產生紅色熒光;但遇到DNA時,則染料之間的交互作用喪失,而產生綠 色熒光。
熒光顯微鏡的光源可以是鹵素石英燈,高壓汞蒸氣燈或氙弧光燈。 可以將熒光與抗血淸結合進行免疫熒光染色來檢測特殊的菌種。檢測寄主組織中的 特異性病原菌時,就可以采用這種檢測技術
發射紫外光的熒光顯微鏡
因為玻璃能吸收紫外線,所以這種顯微鏡的聚光鏡係統要用石英製造。物鏡和目鏡可以用普通玻璃製造,因為它們隻用於觀察樣品發出的可見光。但是需要在光路h安裝 斜棱鏡紫外濾光片以保護眼睛,還應在顯微鏡載物台前安裝紫外濾光屏以防止紫外光 散射。
育接表麵熒光顯微鏡
在表麵熒光顯微鏡中,激發光直接通過R鏡係統從上部照射到樣品上,光路應該在聚 焦樣品的同吋,也能使激發光聚焦。
這種顯微鏡操作方法與膜過濾結合有特殊的用途。直接表麵熒光膜技術(DEFT)的 發展始於對末加工奶(Pettipher等,1980)和熱處理奶的快 速細菌計數r這種方法的最卨靈敏度能達到103〜104個/g。
膜過濾檢測方法已經成熟應用於液體或經過適當處理後能通過濾膜的樣品。例如, 用解蛋白酶將牛奶中的牛體細胞分解,並用表麵活性劑打碎牛奶中的臘肪小球,就可以使 用這種技術進行牛奶中細菌的檢測。這種方法也可以用於檢測其他種類的食品。
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