即最低（或最小）抑菌濃度（MIC）的測定。
基本原理：
在肉湯或瓊脂中將抗菌藥物進行一係列（對倍）稀釋後，定量接種待檢菌，35度孵育24h後觀察。抑製待檢菌肉眼可生長的最低藥物濃度，即為該藥物對待檢菌的最低抑菌濃度。
試驗方法
1. 取無菌試管2排，分別為待檢菌菌液管和質控菌菌液管，管中為經肉湯倍比稀釋的抗菌藥物。（不同抗菌藥物對不同的特定細菌所設置的抗菌藥物梯度不同。）
2.另再取3支試管，分別作為肉湯對照管、待檢菌生長對照管和質控菌生長對照管。
3. 加入不同濃度的含抗菌藥物的肉湯和菌懸液後（加入菌懸液的最終濃度－肉湯稀釋法105CFU/ml，瓊脂稀釋法為104CFU/點），置35度培養箱中孵育18－24h，觀察有無細菌生長。
例：
取無菌試管26支，排成2排。每管加入MH肉湯2ml，在第一管加入經MH肉湯稀釋的藥物原液（256mg/L）2ml混勻，然後吸取2ml至第2管，混勻後再吸取2ml至第3管。如此連續對倍稀釋至第13管，並從第13管中吸取2ml棄去。
此時各管含藥濃度依次為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125mg/L。
第1排試管每管加入待檢菌菌液（1×107CFU/ml）0.1ml,第2排試管每管加入質控菌菌液（1×107CFU/ml）0.1ml，最終接種菌量約為5×105CFU/ml
結果判斷
藥物最低濃度管無細菌生長者（對照管細菌生長良好），即為待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）。
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