1 染色鏡檢：李斯特氏菌為革蘭氏陽性短杆菌，大小為（0.4 μm～0.5 μm）×（0.5 μm～2.0 μm）；用生理鹽水製成菌懸液，在油鏡或相差顯微鏡下觀察，該菌出現輕微旋轉或翻滾樣的運動。
2 動力試驗：李斯特氏菌有動力，呈傘狀生長或月牙狀生長。
3 生化鑒定：挑取純培養的單個可疑菌落，進行過氧化氫酶試驗，過氧化氫酶陽性反應的菌落繼續進行糖發酵試驗和MR-VP 試驗。單核細胞增生李斯特氏菌的主要生化特征見表1。
4 溶血試驗：將羊血瓊脂平板底麵劃分為20 個～25 個小格，挑取純培養的單個可疑菌落刺種到血平板上，每格刺種一個菌落，並刺種陽性對照菌（單增李斯特氏菌和伊氏李斯特氏菌）和陰性對照菌（英諾克李斯特氏菌），穿刺時盡量接近底部，但不要觸到底麵，同時避免瓊脂破裂，36 ℃±1 ℃培養24 h～48 h，於明亮處觀察，單增李斯特氏菌和斯氏李斯特氏菌在刺種點周圍產生狹小的透明溶血環，英諾克李斯特氏菌無溶血環，伊氏李斯特氏菌產生大的透明溶血環。
5 協同溶血試驗 （cAMP）：在羊血瓊脂平板上平行劃線接種金黃色葡萄球菌和馬紅球菌，挑取純培養的單個可疑菌落垂直劃線接種於平行線之間，垂直線兩端不要觸及平行線，於30 ℃±1 ℃培養24 h～48 h。單核細胞增生李斯特氏菌在靠近金黃色葡萄球菌的接種端溶血增強，斯氏李斯特氏菌的溶血也增強，而伊氏李斯特氏菌在靠近馬紅球菌的接種端溶血增強。
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