樣品處理
冷凍樣品應在45 ℃以下不超過15 min 或在2 ℃~5 ℃不超過18 h 解凍,
若不能及時檢驗,應放於-15 ℃左右保存;非冷凍而易腐的樣品應盡可能及時檢驗,若不能及時檢驗,應置於2 ℃~5 ℃冰箱保存,24 h 內檢驗。
樣品製備稱取樣品25 g,放入盛有225 mL PBS 或生理鹽水的無菌均質杯內,用旋轉刀片式均質器以8000 r/min~10000 r/min 均質1 min~2 min,或放入盛有225 mLPBS 或生理鹽水的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打1 min~2 min。若樣品為10 倍係列稀釋選取3 個適宜連續稀釋度的樣品勻液,各吸取1mL,分別接種於3 管胰酪腖大豆多粘菌素肉湯接種MYP 瓊脂平板
確證試驗
查MPN 表
報告結果
30 ℃±1 ℃ 24 h~48 h
30 ℃±1 ℃ 48 h±2 h
檢樣
25 g(mL)樣品+225 mL 稀釋液,均質液態,吸取25 mL 樣品至盛有225 mL PBS 或生理鹽水的無菌錐形瓶(瓶內可預置適當數量的無菌玻璃珠)中,振蕩混勻,作為1:10 的樣品勻液。
樣品的稀釋
吸取上述1:10 的樣品勻液1 mL 加到裝有9 mL PBS 或生理鹽水的稀釋管中,充分混勻製成1:100 的樣品勻液。根據對樣品汙染狀況的估計,按上述操作,依次製成十倍遞增係列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1 次,換用1 支1mL 無菌吸管或吸頭。
樣品接種
取三個適宜連續稀釋度的樣品勻液(液體樣品可包括原液),接種於10 mL胰酪腖大豆多粘菌素肉湯中,每一稀釋度接種3 管,每管接種1 mL(如果接種量需要超過1 mL,則用雙料胰酪腖大豆多粘菌素肉湯)。於30 ℃±1 ℃培養48h±2 h。
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