樣品的運輸與保存
儲存和運輸過程中保持樣品溫度在0 ℃~5 ℃。實驗室接到樣品後應盡快進行檢測。如果暫時不能檢測應將樣品保存於-80℃冰箱中。
病毒的富集
無菌取樣,在5 g檢樣中加入35 mL甘氨酸緩衝液(樣品重量與緩衝液體積之比為1:7);組織勻漿器中高速勻漿3 min,充分破碎混勻。
將所有均質液轉移到50 mL離心管中,37 ℃孵育30 min或室溫下振蕩30min;4 ℃,10000×g離心30 min。
取上清,加入10ml氯仿或更多,充分振搖,放置10min,中間振搖一次,4 ℃,10000×g離心30 min。
取上清至另一幹淨的100 mL離心管中,加入等體積的PEG 8000溶液(PEG終濃度為8%),上下顛倒離心管以充分混勻。
冰上放置至少1 h,4℃,10000×g離心5 min。棄去上清,保留沉澱。
病毒RNA的提取和純化使用商品化的病毒RNA 提取試劑盒進行RNA 的提取和純化,操作步驟請參考產品說明書。
為防止RNA 降解,所用實驗用具及溶液應無RNA 酶,操作過程中應自始自終佩戴一次性橡膠或乳膠手套,並經常更換。
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