選擇2~3個適宜的連續稀釋度的樣品勻液(液體樣品可以選擇原液),每個稀釋度分別吸取0.1mL接種到MYP瓊脂平板上,每稀釋度接種兩個MYP瓊脂平板。用無菌L棒塗布整個平板,注意不要觸及平板邊緣。使用前,如MYP瓊脂平板表麵有水珠,可放在25℃ ~ 50℃的培養箱裏幹燥,直到平板表麵的水珠消失。
塗布後,將平板置於30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h後(原標準為36 ℃±1 ℃培養12 h~20 h) ,選取具有15個~150個典型或可疑蠟樣芽胞杆菌菌落的平板,進行計數。並計算同一稀釋度兩個平板的平均菌落數。如果菌落不典型,可繼續培養18 h~24 h再計數。
計數後,從每個平板選取至少5個已計數的典型或可疑菌落,如果一個平板上少於5個典型或可疑菌落,則取所有典型或可疑菌落,分別劃線接種於營養瓊脂平板, 30 ℃±1 ℃培養24 h±2 h,進行確證實驗。
根據確證實驗確定為蠟樣芽胞杆菌的菌落數,按比例計算出該平板上蠟樣芽胞杆菌菌落數,然後計算同一稀釋度兩個平板的平均蠟樣芽胞杆菌數,再乘其稀釋倍數,再乘以10,即得每g(mL)樣品中蠟樣芽胞杆菌數並作出報告。
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