方法和取樣量
定量檢驗是應用“三管”增菌法,檢驗和定量樣品中極少量的阪崎腸杆菌(克羅諾杆菌屬)。檢驗需 要333 g樣品。
樣品製備
取樣前消毒樣品包裝的開啟處和取樣勺。無菌稱取樣品100 g,10 g和1 g各三份分別加人2 L, 250 mL和125 mL的樣品稀釋瓶中,加入9倍預熱到45℃的滅菌蒸餾水(1 : 10稀釋),或者將樣品直 接稱量到裝有9倍預熱到45℃的滅菌蒸餾水的樣品稀釋瓶中,振搖使樣品充分混勻,36℃±1℃培養18h~22h。
選擇性增菌
分別移取培養18h~22h的懸液各1.0 mL加人9.0 mL克羅諾杆菌肉湯中,36℃ ± 1 °C培養 24 h±2 h,取1.0 mL滅菌生理鹽水,加人9.0 mL克羅諾杆菌肉湯中作為空白對照。
初篩結果觀察
將培養後的試管置於366 nm波長的UV燈下觀察是否產生熒光,以空白樣品作為對照。如果無 熒光產生,阪崎腸杆菌(克羅諾杆菌屬)為陰性;如果產生熒光,則以下列步驟進行操作。
可疑菌分離
輕輕混勻增菌液,每份增菌液用3 mm接種環(10μL)分別接種2個克羅諾杆菌顯色平板,三區法 或四區法劃線,以得到單個菌落。將平板置36 ℃±1 ℃培養18 h〜22 h。
結果判別
觀察平板上阪崎腸杆菌(克羅諾杆菌屬)的典型形態。在克羅諾杆菌顯色平板上為藍綠色菌落,圓 形,直徑1 mm〜2 mm。
可疑菌產黃色素試驗
從顯色平板上挑取1〜5個可疑菌落分別接種到TSA平板上,25℃±1℃培養48 h〜72 h。
可疑菌生化鑒定實驗
從TSA平板上挑取黃色菌落,革蘭氏染色,做氧化酶試驗。革蘭氏染色陰性,氧化酶試驗陰性,應 用生化鑒定試劑或其他細菌鑒定係統進行鑒定。
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