1 增菌
用無菌操作取樣品25g，加入有225mL的增菌液中（銀耳取樣品1g，加入有20mL的增菌液中）置於36±1℃恒溫培養箱中培養48h。
2 平板分離
取增菌液1環，劃線按種PDA平板， 36±1℃培養24~48h。
PDA平板：菌落1~2mm，灰白色或乳白色，光滑、濕潤、邊緣整齊。培養48h後，中心有凸起，呈草帽狀，菌落周圍有黃綠色素擴散到基質中。
卵黃瓊脂平板：菌落表麵光滑、濕潤，48h後，菌落周圍形成乳白色混濁環，斜射日光下可見環的表麵呈虹彩現象。
SS瓊脂平板：不生長或微弱生長。
3 純化
從卵黃瓊脂平板上挑取卵黃脂酶陽性，並帶有虹彩環的單個菌落，接種PDA斜麵， 36±1℃培養24h。
4 生化試驗
從純化培養的PDA斜麵上挑取少量菌苔，分別接種於Hugh－Leifson培養基、蛋白腖水、緩衝蛋白腖水、西檬氏檸檬酸鹽培養基、糖發酵管及苯丙氨酸培養基， 36±1℃培養，按單項試驗要求分別進行觀察。產毒培養
取已確證為椰毒假單胞菌酵米麵亞種的菌株接種PDA斜麵，36±1℃，培養24h，加入3mL滅菌生理鹽水，製成約100億/mL的菌懸液，用無菌吸管吸取0.5mL，滴在鋪好滅菌玻璃紙的半固體PDA平板上，用滅菌L形棒塗布均勻， 26±1℃，培養5d。取下帶菌的玻璃紙，將半固體平板放入消毒鍋內，100℃流動蒸汽滅菌30min。室 溫冷卻後，置－10~－20℃冰箱過液。將冰凍好的半固體平板置室 溫融化，用滅菌吸取出凍融液，經濾紙過濾放滅菌試管或三角燒瓶中，4℃避光保存，此為粗毒素。
動物試驗
取粗毒素或經水浴蒸發的5~10倍濃縮液0.5mL，灌胃體重為18~20g的小白鼠3隻，觀察7天。若菌株產米酵菌酸，小白鼠在灌胃後20min~24h內發病、死亡。主要症狀為豎毛，萎靡不振，繼而躁動，行步蹣跚、肢體麻痹、癱軟、抽搐，呈角弓反張狀，呼吸急促、死亡。
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