取增菌後或篩選試驗陽性的mEC+n肉湯，分別劃線或適當稀釋後取0.1mL塗布接種於CT-SMAC平板和改良CHROMagar O157顯色瓊脂平板上，於36±1℃培養18～24h，觀察菌落。必要時將混合菌落分純。在CT-SMAC平板上，發酵山梨醇的菌落為紅色；典型菌落為不發酵山梨醇的圓形、光滑、較小的無色菌落，中心呈現較暗的灰褐色，用接種針挑起時無拉絲現象。在改良CHROMagar O157顯色瓊脂平板上為圓形、較小的菌落，中心呈淡紫色-紫紅色，邊緣無色或淺灰色。
CCP:
增菌後的肉湯在取樣前，應輕微搖晃混勻。
劃線時應多次往返，保證分離效果。
塗布時應適當稀釋。
注意區分典型菌落，必要十分純。大部分非O157 E.coli發酵山梨醇，仍有6%不發酵山梨醇，它們與摩根氏菌和哈夫尼亞菌一樣在TC-SMAC上表現為與O157相同的菌落特征。
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