1 、細菌、黴菌與酵母菌計數
(1) 平皿菌落計數法 取均勻供試液,進一步稀釋成1:10<2> 、1:10<3>等適宜的稀
釋度。分別取連續三級10倍稀釋的供試液各1ml,置直徑約90mm的平皿中，再注入約45℃
的培養基約15ml，混勻，待凝固後，倒置培養，每稀釋度應作2～3個平皿。
細菌計數用營養瓊脂培養基，黴菌計數用虎紅瓊脂培養基，酵母菌計數用酵母浸出
粉腖葡萄糖瓊脂培養基，合劑用虎紅瓊脂培養基與酵母浸出粉腖葡萄糖瓊脂培養基。
菌數測定空白對照試驗 取供試驗用的稀釋劑各1ml，置4個無菌平皿中，分別按細
菌、黴菌計數用的培養基製備平板、培養、檢查，不得長菌。
細菌培養時間為48小時,分別在24及48小時點計菌落數,一般以48小時菌落數為準。
黴菌、酵母培養時間為72小時，分別在48及72小時點計菌落數，一般以72小時菌落數為
準。
營養瓊脂平板一般點計細菌菌落數，虎紅瓊脂平板一般點計黴菌菌落數，在特殊情
況下，前者同時點計黴菌、酵母菌菌落數，後者同時點計細菌菌落數。酵母浸出粉腖葡
萄糖瓊脂平板僅點計酵母菌菌落數。液體製劑同時點計黴菌菌落數及酵母菌菌落數。含
蜂蜜及王漿的合劑的黴菌、酵母菌菌落數分別測定，合並計數。菌落如蔓延生長成片，
不宜計數。
點計後，計算各稀釋級的平均菌落數，按菌數報告規則報告菌數。
菌數報告規則 細菌宜選取平均菌落數在30～300之間的稀釋級,黴菌宜選取平均菌
落數在30～100之間的稀釋級作為報告菌數計算的依據。如有1個稀釋級在30～300(30～
100)之間時,將該稀釋級的菌落數乘以稀釋倍數報告；如同時有2個稀釋級在30～300(30
～100)之間時，按下式計算兩級比值。
高稀釋級的平均菌落數×稀釋倍數
比值＝────────────────
低稀釋級的平均菌落數×稀釋倍數
當比值≤2時，以兩稀釋級的均值報告，當比值＞2時，以低稀釋級平均菌落數乘以
稀釋倍數報告；如同時有3個稀釋級的平均菌落數均在30～300之間時,以後2個稀釋級計
算級間比值報告；如各稀釋級的平均菌落數均不在30～300之間，以最接近30或300的稀
釋級平均菌落數乘以稀釋倍數報告；如各稀釋級平均菌落數均在300(100)以上，按最高
稀釋級菌落數乘以稀釋倍數報告；如各稀釋級平均菌落數均小於30時，一般按最低稀釋
級的菌落數乘以稀釋倍數報告。如當1:10（或1:100 ）稀釋級平均菌落數等於或大於原
液（或1:10稀釋級）時，應以培養基稀釋法測定，按測定結果報告菌數。
(2) 培養基稀釋法 取供試液（原液或1:10供試液）3份，每份各1ml,分別注入5個
平皿內（每皿各0.2ml）。每1個平皿傾注營養瓊脂培養基約15ml，混勻，凝固後，倒置
培養，計數。每1ml注入的5個平板點計的菌落數之和，即為每1ml的菌落數，共得3組數
據。以3份供試液菌落數的平均值乘以稀釋倍數報告。
如各稀釋級平板均無菌落生長，或僅最低稀釋級平均菌落數小於1時,則報告菌數為
小於10個。
2 、控製菌檢查 除另有規定外，取供試液10ml(相當供試品1g、1ml 、10cm<2>),
直接或處理後接種，經增菌分離培養後，進行革蘭氏染色、生化試驗與血清凝集試驗項
檢查。
(1) 大腸杆菌(Escherichia coli) 取膽鹽乳糖培養基3份，每份各100ml,2份分別
加入規定量的供試液，其中1份加入對照菌液作陽性對照，第3份加入與供試液等量的稀
釋劑作空白對照。培養18～24小時（必要可延至48小時）。空白對照應無菌生長。其餘
2份培養物劃線接種於曙紅亞甲藍瓊脂平板或麥康凱瓊脂平板,培養18～24小時。當陽性
對照的平板呈陽性菌落時,供試品的平板無菌落生長,或有菌落但不同於表1所列的特征,
可判為未檢出大腸杆菌。
表 1 大腸杆菌菌落形態特征
───────┬──────────────────
培養基 │ 菌 落 形 態
───────┼──────────────────
曙紅亞甲藍瓊脂│呈紫黑色、淺紫色、藍紫色或粉紅色，
│菌落中心深紫色或無明顯暗色中心，圓
│形，稍凸起，邊緣整齊，表麵光滑，濕
│潤，常有金屬光澤。
───────┼──────────────────
麥康凱瓊脂 │鮮桃紅色或微紅色，菌落中心深桃紅色，
│圓形，扁平，邊緣整齊，表麵光滑，濕潤。
───────┴──────────────────
如生長的菌落與表1所列特征相符或疑似者,應挑選2～3個菌落分別接種於營養瓊脂
培養基斜麵，培養18小時，作以下檢查：
革蘭氏染色 取上述斜麵培養物，塗片，固定。以結晶紫染液染色1分鍾,水洗，革
蘭氏碘液媒染1分鍾，水洗，濾紙吸幹餘水。以乙醇脫色20～30秒鍾,水洗。滴加沙黃染
液複染1分鍾，待幹後鏡檢。
乳糖發酵試驗 取上述斜麵培養物，接種於乳糖發酵管，培養24～48小時，觀察產
酸（培養基變色），產氣（杜氏管內有氣泡）。
靛基質試驗 取上述斜麵培養物，接種於蛋白腖水培養基中，培養48±2小時,沿管
壁加入對靛基質試液0.3～0.5ml，液麵呈玫瑰紅色為陽性，呈試劑本色為陰性。
甲基紅試驗 取上述斜麵培養物，接種於磷酸鹽葡萄糖腖水培養基中,培養48±2小
時，於每1ml培養液中加入甲基紅指示劑1滴，立即觀察，呈鮮紅色或桔紅色為陽性，呈
黃色為陰性。
乙酰甲基甲醇生成試驗（V-P 試驗） 取上述斜麵培養物，接種於磷酸鹽葡萄糖腖
水培養基，培養48±2小時，於每2ml培養液中加入α-萘酚乙醇液1ml，混勻，再加40％
氫氧化鉀溶液0.4ml，充分振搖，出現紅色為陽性。加試劑4小時內，如出現紅色亦應判
為陽性，無紅色反應為陰性。
枸櫞酸鹽利用試驗 取上述斜麵培養物，接種於枸櫞酸鹽培養基的斜麵上，培養48
±2小時,培養基斜麵有菌苔生長，培養基由綠色變為藍色時為陽性，培養基顏色無改變
時為陰性。
當空白對照試驗呈陰性，供試品檢查為革蘭氏陰性無芽孢杆菌；乳糖發酵產酸產氣
或產酸不產氣；IMViC 試驗為陽性、陽性、陰性、陰性或陰性、陽性、陰性、陰性，判
為檢出大腸杆菌。對可疑反應的菌株，應重新分離培養後，再作生化試驗證實。
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