對於每個陽性樣品,保存檢出的食源性致病菌分離株,以便用於進一步的研究;分離菌株的編號應具有唯一性,標識清楚;標簽應防水、字跡耐凍;各省級實驗室應建立食源性致病菌菌種庫,妥善保存食源性致病菌分離株。
推薦常見的食源性致病菌菌株保藏方法有以下2 種:
1. 甘油冷凍保藏法
(1) 保藏時間
本方法適合於菌種的長期保藏,保藏時間可達10 年以上。
(2) 方法
在充分加熱混勻的BHI(副溶血性弧菌、創傷弧菌保存時BHI 中NaCl 應加
至3%)中加入甘油,使甘油達總體積的40%~50%,充分混合,分裝至菌種保存管(2 mL 左右),121 ℃高壓20 min,備用;使用無菌棉簽從非選擇性平板上取新鮮純培養菌落,加入裝有BHI 和甘油的無菌凍存管中,混勻後,-80℃保存(如果無-80℃冰箱,可選擇-40℃保存,但保存效果較差)。
(3) 注意事項
每株菌至少保存2 管,分別放置在2 個不同凍存盒中,一盒日常使用,另外一盒長期保存;使用時,取出相應的凍存盒,快速接種,以避免反複凍融;使用時,無菌操作,避免汙染。
2. 半固體保藏法
(4) 保藏時間
本方法適合於短期菌種保藏,保藏時間一般為3~6 個月。
(5) 方法
無菌操作,挑取待保藏的菌種,穿刺接種約含5 mL 無菌半固體營養瓊脂或
半固體腦心浸液瓊脂(副溶血性弧菌、創傷弧菌保存時BHI 中NaCl 應加3%)的小試管(約15 mm×100 mm)中。無菌操作吸取滅菌液體石蠟,加入已培養好的菌種上麵,液體石蠟用量以高出半固體1 cm 為準,使菌種與空氣隔絕。將試管直立,置4 ℃或室溫(副溶血性弧菌、創傷弧菌)下保存。
(6) 注意事項
副溶血性弧菌和創傷弧菌應放置室溫保存。
此外,也可以購買商品化的菌種保存管保存菌株,具體方法見生產廠家提供的操作指南。
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