樣品的稀釋
固體和半固體食品:以無菌操作取25g樣品,放入裝有225 mL生理鹽水的無菌均質杯內,於8000 ~10000r/min均質1min~2min,製成1:10樣品勻液,或放入225 mL生理鹽水的無菌均質袋中,用拍擊式均質器拍打1min~2min,製成1:10的樣品勻液。
液體食品:以無菌吸管吸取樣品25mL放入裝有225mL生理鹽水的無菌玻璃瓶(瓶內預置適當數量的玻璃珠)中,充分混勻,製成1:10的樣品勻液。
用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10的樣品勻液1 mL加到裝有9 mL PBS的稀釋管中,充分混勻製成1:100的樣品勻液。
製備十倍遞增係列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋1次,換用1支1mL無菌吸管或吸頭。
根據對樣品汙染狀況的估計,選擇2~3個適宜的連續稀釋度的樣品勻液(液體樣品可以選擇原液),每個稀釋度分別吸取1mL樣品均勻加入兩個無菌平皿內。同時分別取1mL稀釋液加入兩個無菌平皿內作空白對照。
及時將15~20ml冷卻至46℃平板計數瓊脂培養基(可放置於46℃ ±1℃恒溫水浴箱內保溫)傾注平板,並轉動平皿使其混合均勻。
瓊脂凝固後,將平板翻轉,置36±1℃培養48±2h。水產品30±1℃培養72±3h。
如果樣品中可能含有在瓊脂培養基表麵彌漫生成的菌落時,可在凝固後的瓊脂表麵覆蓋一薄層瓊脂培養基(4mL),凝固後翻轉平板,進行培養。
菌落計數
可用肉眼觀察,必要時用放大鏡檢查,記錄稀釋倍數和相應的菌落數量。菌落計數以菌落形成單位((CFU)表示。
選取菌落數在30~300之間、無蔓延菌落生成的平板計數菌落總數。低於30 CFU的平板記錄具體菌落數,大於300的可記錄為多不可計。每個稀釋度的菌落數應采用兩個平板的平均數。
其中一個平板有較大片狀菌落生長時,則不宜采用,而應以無片狀菌落生長的平板作為該稀釋度的菌落數;若片狀菌落不到平板一半,而另一半又分布均勻,則可以半個平板的菌落數乘2代表一個平板的菌落數。
當平板上出現菌落間無明顯界限的鏈狀生長時,則將每條單鏈作為一個菌落計數。
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