用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1:10樣品勻液1.0 mL，沿管壁緩慢注於裝有9 mL0.85％生理鹽水的無菌試管中（注意吸管尖端不要觸及稀釋液），振搖試管或換用1支無菌吸管反複吹打使其混合均勻，製成1:100的樣品勻液。
另取1 mL無菌吸管或微量移液器吸頭，按上述操作順序，做10倍遞增樣品勻液，如此每遞增稀釋一次，即換用1次1 mL滅菌吸管或吸頭。
根據食品衛生標準要求或對檢樣汙染情況的估計，選擇三個連續的適宜稀釋度，每個稀釋度吸取0.1 mL稀釋液於MRS瓊脂平板或MC瓊脂平板進行表麵塗布，每個稀釋度作兩個平皿。MC瓊脂平板用於嗜熱鏈球菌的計數。含雙歧杆菌的樣品需絕對厭氧，置36 ℃±1 ℃恒溫箱內培養48 h±2 h,不含雙歧杆菌的樣品需兼性厭氧，置36 ℃±1 ℃恒溫箱內培養48 h±2 h,培養後選取菌落數在30～300之間的平板進行計數。乳酸菌在MRS和MC培養基上菌落生長形態特征。
挑取3個或以上的可疑菌落，嗜熱鏈球菌接種於MC瓊脂平板，乳杆菌屬和雙歧杆菌屬接種於MRS瓊脂平板，雙歧杆菌需絕對厭氧，置36 ℃±1 ℃恒溫箱內培養48 h±2 h，不含雙歧杆菌需兼性厭氧，置36 ℃±1℃恒溫箱內培養48 h±2 h。
鑒定
塗片鏡檢：乳杆菌屬細胞形態多樣，從長的杆狀和細長杆狀到彎曲杆狀及短杆狀，一般形成鏈。通常不運動。無芽胞，革蘭氏染色陽性。嗜熱鏈球菌形態為球形或球杆狀，直徑為0.5 μm～2.0 μm，細胞成對或成鏈排列，無芽胞，革蘭氏染色陽性。雙歧杆菌屬細胞呈多樣形態，有較規則短杆狀或纖細杆狀具有尖細末段的細胞，也有呈球形者，可形成各種分支或分叉形。無芽胞，革蘭氏染色陽性。
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