A.1改良胰蛋白腖大豆肉湯培養基（Modified tryptone soybean broth,mTSB）
A.1.1基礎培養基（胰蛋白腖大豆肉湯TSB）
A.1.1.1成分
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胰蛋白腖 |
17.0 g |
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大豆蛋白腖 |
3.0 g |
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氯化鈉 |
5.0 g |
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磷酸二氫鉀（無水） |
2.5 g |
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葡萄糖 |
2.5 g |
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蒸餾水 |
1000.0 mL |
A.1.1.2製法
將A.1.1.1中各成分溶於蒸餾水中，加熱溶解，校正pH至7.3±0.2，121 ℃滅菌15 min，備用。
A.1.2 抗生素溶液
A.1.2.1 多黏菌素溶液
稱取10 mg多黏菌素B於10 mL滅菌蒸餾水中，振搖混勻, 充分溶解後過濾除菌。
A.1.2.2 萘啶酮酸鈉溶液
稱取10 mg萘啶酮酸於10 mL 0.05 mol/L氫氧化鈉溶液中，振搖混勻,充分溶解後過濾除菌。
A.1.3 完全培養基
A.1.3.1 成分
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胰蛋白腖大豆肉湯(TSB) |
1 000.0 mL |
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多黏菌素溶液 |
10.0 mL |
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萘啶酮酸鈉溶液 |
10.0 mL |
A.1.3.2 製法
無菌條件下，將A.1.3.1中各成分進行混合，充分混勻，分裝備用。
A.2 哥倫比亞CNA血瓊脂(Columbia CNA blood agar)
A.2.1 成分
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胰酪蛋白腖 |
12.0 g |
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動物組織蛋白消化液 |
5.0 g |
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酵母提取物 |
3.0 g |
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牛肉提取物 |
3.0 g |
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玉米澱粉 |
1.0 g |
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氯化鈉 |
5.0 g |
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瓊脂 |
13.5 g |
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多黏菌素 |
0.01 g |
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萘啶酸 |
0.01 g |
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蒸餾水 |
1000.0 mL |
A.3.1.2 製法
將基礎培養基成分溶解於蒸餾水中，加熱促其溶解。121 ℃高壓滅菌15 min。
A.3.2 無菌脫纖維綿羊血
無菌操作條件下，將綿羊血加入到盛有滅菌玻璃珠的容器中，振搖約10min，靜置後除去附有血纖維的玻璃珠即可。
A.3.3完全培養基
A.3.3.1 組分
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基礎培養基 |
1000.0 mL |
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無菌脫纖維綿羊血 |
50.0mL |
A.3.3.2 製法
當基礎培養基的溫度為45℃左右時，無菌加入綿羊血，混勻。校正pH至7.2±0.2。傾注15 mL於無菌平皿中，靜置至培養基凝固。使用前需預先幹燥平板。預先製備的平板未幹燥時在室溫放置不得超過4 h，或在4℃冷藏不得超過7 d。
A.4 革蘭氏染色液
A.4.1 結晶紫染色液基礎培養基
A.4.1.1 成分
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結晶紫 |
1.0 g |
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95％乙醇 |
20.0mL |
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1％草酸銨水溶液 |
80.0mL |
A.4.1.2 製法
將結晶紫完全溶解於乙醇中，然後與草酸銨溶液混合。
A.4.2革蘭氏碘液
A.4.2.1成分
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碘 |
1.0 g |
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碘化鉀 |
2.0 g |
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蒸餾水 |
300.0mL |
A.4.2.2 製法
將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸餾水少許充分振搖，待完全溶解後，再加蒸餾水至300mL。
A.4.3.1 成分
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沙黃 |
0.25g |
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95％乙醇 |
10.0mL |
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蒸餾水 |
90.0mL |
A.4.3.2 製法
將沙黃溶解於乙醇中，然後用蒸餾水稀釋。
A.4.4染色操作步驟
將塗片在酒精燈火焰上固定，滴加結晶紫染色液，染1min，水洗；滴加革蘭氏碘液，作用1min，水洗；滴加95％乙醇脫色，約15 s～30s，直至染色液被洗掉，不要過分脫色，水洗；滴加複染液，複染1min，水洗後進行幹燥，鏡檢。
A.5胰蛋白腖大豆肉湯（Tryptone soybean broth, TSB）
A.5.1 成分
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胰蛋白腖 |
17.0 g |
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大豆蛋白腖 |
3.0 g |
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氯化鈉 |
5.0 g |
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磷酸二氫鉀（無水） |
2.5 g |
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葡萄糖 |
2.5 g |
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蒸餾水 |
1000.0 mL |
A.5.2製法
將A.5.1中各成分溶於蒸餾水中，加熱溶解，校正pH至7.3±0.2，121 ℃滅菌15 min，分裝備用。
A.6草酸鉀血漿
A.6.1 成分
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草酸鉀 |
0.01 g |
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人血 |
5.0 mL |
A.6.2 製法
草酸鉀0.01 g放入滅菌小試管中，再加入5 mL人血，混勻，經離心沉澱，吸取上清液即為草酸鉀血漿。
A.7 0.25％氯化鈣(CaCl2)溶液
A.7.1 成分
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氯化鈣（無水） |
22.2 g |
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蒸餾水 |
1000.0 mL |
A.7.2 製法
稱取22.2g氯化鈣（無水）溶於蒸餾水中，分裝備用。
A.8 3％過氧化氫(H2O2)溶液
A.8.1 成分
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30％過氧化氫(H2O2)溶液 |
100.0 mL |
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蒸餾水 |
900.0 mL |
A.8.2 製法
吸取100mL 30％過氧化氫(H2O2)溶液，溶於蒸餾水中，混勻，分裝備用。
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