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氣象色譜法分析雙歧杆菌的有機酸代謝產物



錄入時間:2015-1-4 11:45:53 來源:betway必威西汉姆联生物

雙歧杆菌培養液製備

      挑取BBL瓊脂上純培養的雙歧杆菌接種於PYG液體培養基,同時用未接種菌的PYG液體培養基做空白對照,絕對厭氧,36±1℃ 培養48±2 h。

標準液配製

乙酸標準溶液:準確吸取乙酸5.70ml 加水稀釋至100.0ml,搖勻,附錄B方法進行標定,配成約1.0 mol/L的乙酸標準溶液。乙酸使用液:將經標定的乙酸標準溶液用水稀釋至20.0 mmol/L。

乳酸標準溶液:準確吸取含量為85-90%的乳酸0.84 ml,加水稀釋至100.0ml,搖勻,配成1.0 mol/L的乳酸標準溶液。乳酸使用液:將乳酸標準溶液用水稀釋至20.0 mmol/L。

乙酸的處理

       取雙歧杆菌培養液2.0-3.0ml放入10ml離心管中,加入0.2ml 50%硫酸溶液,混勻,加入2.0ml丙酮,混勻後加過量氯化鈉,劇烈振搖1min,再加入2.0ml乙醚,振搖1min後,於3000r/min離心5min,將上清液轉入另一試管中,下層溶液用2.0ml丙酮和2.0ml乙醚重複提取2次,合並有機相,於40℃水浴中用氮氣吹至少量溶液存在,用丙酮定容至1.0 ml,混勻後備用。同樣操作步驟處理乙酸標準和空白培養液。

 

乳酸的處理

         取雙歧杆菌培養液2.0-3.0ml放入10比色管中,100℃水浴10min,加入0.2mL 50%硫酸溶液,混勻,加入1.0mL甲醇,於58℃水浴30min後加水1.0mL,加三氯甲烷1.0mL,振搖3min,3000r/min離心5min,取三氯甲烷層分析。同樣操作步驟處理乳酸標準和空白培養液。

 

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