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嗜熱脂肪芽孢杆菌抑製法檢查抗生素檢查



錄入時間:2015-1-4 11:48:28 來源:betway必威西汉姆联生物

芽孢懸液:將嗜熱脂肪芽孢杆菌菌種劃線移種於營養瓊脂平板表麵,56 ℃培養 24 h 後挑取乳白色半透明圓形特征菌落,在營養瓊脂平板上再次劃線培養,56 ℃培養24 h 後轉入 36 ℃培養 3 d~4 d,鏡檢芽孢產率達到 95%以上時進行芽孢懸液的製備。每 塊平板用 1 mL~3 mL無菌磷酸鹽緩衝液洗脫培養基表麵的菌苔(如果使用克氏瓶,每瓶使用無菌磷酸鹽緩衝液 10 mL~20 mL)。將洗脫液 5 000 r/min離心 15 min。取沉澱物加無菌0.03 mol/L 磷酸鹽緩衝液(pH 7.2)製成 10 9 cfu/mL 芽孢懸液,置 80 ℃恒溫水浴中 10 min 後,密封防止水分蒸發,置冰箱保存備用。

 

測試培養基:在溴甲酚紫葡萄糖蛋白腖培養基中加入適量芽孢懸液,混合均勻,使最終的芽孢濃度為 8×10 5 ~2×10 6 cfu/mL。混合芽孢懸液的溴甲酚紫葡萄糖蛋白腖培養基分裝小試管,每管 200 μL,密封防止水分蒸發。這樣配製好的測試培養基可以在冰箱保存 6 個月。

培養操作:吸 取樣品100 μL加入含有芽孢的測試培養基中,輕 輕旋轉試管混勻。每 份檢樣作二份,另外再作陰性和陽性對照各一份,陽性對照管為 100 μL 青黴素 G 參照溶液,陰性對照管為 100 μL 無抗生素的脫脂乳。於 65℃水浴培養 2.5 h,觀察培養基顏色的變化。如果顏色沒有變化,須再於水浴中培養 30 min 作最終觀察。

判斷方法:在白色背景前從側麵和底部觀察小試管內培養基顏色。保持培養基原有的紫色為陽性結果,培養基變成黃色或黃綠色為陰性結果,顏色處於二者之間,為可疑結果。對於可疑結果應繼續培養30 min 再進行最終觀察。如果培養基顏色仍然處於黃色-紫色之間,表示抗生素濃度接近方法的最低檢出限,此時建議重新檢測一次。

報告:

最終觀察時,培養基依然保持原有的紫色,可以報告為抗生素殘留陽性。

培養基變為呈黃色或黃綠色時,可以報告為抗生素殘留陰性。

本方法檢測幾種常見抗生素的最低檢出限為:青黴素3 μg/L,鏈黴素 50 μg/L,慶大黴素 30 μg/L,卡那黴素 50 μg/L。

 


 

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