微孔濾膜過濾除菌
（一）目的要求
1．了解過濾除菌的原理。
2．掌握微孔濾膜過濾除菌的方法。
（二）基本原理
過濾除菌是通過機械作用濾去液體或氣體中細菌的方法。根據不同的需要選用不同的濾器和濾板材料。微孔濾膜過濾器是由上下二個分別具有出口和入口連接裝置的塑料蓋盒組成，出口處可連接針頭，人口處可連接針筒，使用時將濾膜裝入兩塑料蓋盒之間，旋緊蓋盒，當溶液從針筒注入濾器時，此濾器將各種微生物阻留在微孔濾膜上麵，從而達到除菌的目的。根據待除菌溶液量的多少，可選用不同大小的濾器。此法除菌的最大優點是可以不破壞溶液中各種物質的化學成分，但由於濾量有限，所以一般隻適用於實驗室中小量溶液的過濾除菌。
（三）器材
1．培養基 2%的葡萄糖溶液，肉湯蛋白腖平板。
2．儀器或其他用具 注射器，微孔濾膜過濾器，0.22μm濾膜，無菌試管，鑷子，玻璃刮棒。
（四）操作步驟
l．組裝、滅菌
將0.22μm孔徑的濾膜裝入清洗幹淨的塑料濾器中，旋緊壓平，包裝滅菌後待用(0.lMPa，121.5℃滅菌20min)。
2．連接
將滅菌濾器的入口在無菌條件下，以無菌操作方式連接於裝有待濾溶液（2%葡萄糖溶液）的注射器上，將針頭與出口處連接並插入帶橡皮塞的無菌試管中。見圖2—3。
3．壓濾
將注射器中的待濾溶液加壓緩緩擠入過濾到無菌試管中，濾畢，將針頭撥出。
壓濾時，用力要適當，不可太猛太快，以免細菌被擠壓通過澱膠．
4．無菌檢查
無菌操作吸取除菌濾液0.1ml於肉湯蛋白腖平板上，塗布均勻，置37℃溫室中培養24h，檢查是否有菌生長。
5．清洗
棄去塑料濾器上的微孔濾膜，將塑料濾器清洗幹淨，並換上一張新的微孔濾膜，組裝包紮，再經無菌後使用。
整個過程應在無菌條件下嚴格無菌操作，以防汙染，過濾時應避免各連接處出現滲漏現象。
（五）實驗報告
l．結果
記錄無菌檢查結果
2．思考題
(1)你做的過濾除菌實驗效果如何?如果經培養檢查有雜菌生長，你認為是什麽原因造成的?
(2)如果你需要配製一種含有某抗生素的牛肉膏蛋白腖培養基，其抗生素的終濃度(或工作濃度)為50μg/ml，你將如何操作?
(3)過濾除菌應注意哪些問題?
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