微生物菌落的觀察
一、實驗目的和內容
目的：識別細菌、酵母菌、放線菌和黴菌四大類微生物的菌落特征。
內容：
1．觀察已知菌的菌落的形態、大小、色澤、透明度、致密度和邊緣等特征。
2．根據菌落的形態特征判斷未知菌的類別。
二、實驗材料和用具
大腸杆菌(E.coli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、粘紅酵母(Rhodotorula gracitis)、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)、細黃鏈黴菌(Streptomyces microflavus，又稱“5406”抗生菌)、灰色鏈黴菌(Streptomyces griseus )、黑曲黴(Aspergillus niger )、產黃青黴(Penicillium chrysogenum)、球孢白伍菌(Beauveria bassiana)等細菌的斜麵菌種。
牛肉膏蛋白腖培養基、馬鈴薯培養基、高氏1號培養基、無菌水。
接種環、接種針、酒精燈、無菌培養皿多套、電熱恒溫箱。
三、操作步驟
(一)製備已知菌的單菌落
1．製備平板 將已融化的無菌培養基待冷卻至50℃左右，分別製備牛肉膏蛋白腖培養基平板、馬鈴薯蔗糖培養基平板和高氏1號培養基平板各一皿。
2．製備菌懸液或孢子懸液 在培養好的斜麵菌種管內加入5mL無菌水，製成菌懸液後備用。
3．製備單菌落 通過平板劃線法獲得細菌、酵母菌和放線菌的單菌落。用三點接種法獲得黴菌的單菌落。細菌於37℃恒溫培養24～48h，酵母菌於28℃培養2～3d，黴菌和放線菌置28℃培養5～7d，待長成菌落後，仔細觀察四大類微生物菌落的形態特征，並將觀察結果記錄於表4-1中。
(二)製備未知菌落
l．倒平板
2．接種 可用彈土法接種，其要點為：采集校園土壤，待風幹磨碎後，可將細土撒在無菌的硬板紙表麵，先彈去紙麵浮土，然後打開皿蓋，便含土的紙麵對著平板培養基的表麵，用手指在硬板紙背麵輕輕一彈即可接種上各種微生物。
3．培養 將牛肉膏蛋白腖培養基平板倒置於37℃培養箱中恒溫培養2～3d，將馬鈴薯蔗糖培養基倒置於28℃培養箱中恒溫培養3～5d，即可獲得未知菌的單菌落。
4．編號 從培養好的未知平板中，挑選8個不同的單菌落，逐個編號，根據菌落識別要點區分未知菌落類群，並將判斷結果填入表4～2中。
(三)直接觀察菌落
直接用實驗3中的“土壤稀釋分離”獲得的單菌落進行觀察識別，並將結果填入表4-2中。
四、注意事項
觀察菌落特點時，要選擇分離得很開的單個較大菌落；已知菌落和未知菌落要編好號，請勿隨意移動開蓋，以免搞混菌號。
五、實驗報告
1．已知菌落的形態特征記錄於表4～1中。
2．將未知菌落的辨別結果記錄於表4～2中。
七、問題和思考
1．試比較細菌、放線菌、酵母菌和黴菌菌落形態的差異?
2．設計一個實驗，檢測實驗室空氣環境中的微生物類別?
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