乳品中活性益生菌選擇性檢測方法的研究

緒言
隨著人民生活水平的不斷提高，乳製產品的種類日益豐富和多樣化，人體所需的乳酸菌如嗜酸乳杆菌、雙歧杆菌、幹酪乳杆菌、嗜熱乳鏈球菌和保加利亞乳杆菌等通常被作為重要成分加入到各種乳產品當中。乳製品被人體攝入之後，其中包含的活性菌也同時進入到人體內部消化係統，它們能夠幫助平衡腸胃功能健康，抑製對人體有害的各類細菌繁殖，能夠顯著提高人的身體健康水平。但不是隨便攝入活性菌就能夠起到這種效果，而是需要攝入人體內的活性菌達到一定的數量才能夠有效發揮作用。科學表明，人體內部活性菌數量要達到 97cfu/ g (m L) 以上才能夠具有明顯效果。實際上，科學家在對市場上出售的各種乳製品的研究分析發現，大多產品中的包含的乳酸菌的活躍度與濃度都嚴重偏低，這一方麵是由於生產企業不負責任所導致，另一方麵也與當缺乏一種行之有效的活性乳酸菌檢測工具有關，因此也不難理解當前市麵上為什麽存在那麽多含超低乳酸菌的乳製品。為有效檢測出乳製品中活性乳酸菌的活力和濃度，市場上和學術界都有必要盡快找到一種科學有效的計算方法。當前，對於嗜酸乳杆菌、雙歧杆菌等計數方法已有一些研究文獻，但都不是在其純度較低條件下的計數方法，筆者通過文獻綜述發現，關於其他菌類計數方麵的研究也有學者嚐試過，但並沒有取得突破性進展。對此，本文在已有研究文獻的基礎上，總結了一種新的非純度條件下對活性菌計數的方法，能夠有效針對嗜酸乳杆菌、雙歧杆菌、幹酪乳杆菌、嗜熱乳鏈球菌和保加利亞乳杆菌進行科學合理的定量分析，為提高軟製品產品品質提供可靠度科學測量工具。
1. 材料與方法
1. 1 供試菌種
嗜熱乳鏈球菌( S t r e p t o c o c c u st h e r m o p h i l u s , S T ) 、保加利亞乳杆菌( L actobacil lus delbr ueckii ssp.bulgaricus,LB) 、嗜酸乳杆菌( Lactobacill u s a c i d o p h i l u s , L A) 、雙歧杆菌( Bif idobacter ia, BB) 、幹酪乳杆菌(Lactobacillus casei , LC) 均由華中農業大學生物科技學院微生物實驗室提供。
1. 2 儀器與設備
厭氧培養箱; 厭氧培養罐; 好氧培養箱。
1. 3 待檢樣品
( 1) 已知菌樣品： 以脫脂乳為培養基,在所需培養條件下分別培養供試的5 種菌,即為已知菌待檢樣品。
( 2) 乳品樣品： 為市售酸乳或乳酸菌發酵乳飲料, 均含有活性乳酸菌。
2. 結果與分析
2. 1 嗜熱乳鏈球菌、保加利亞乳杆菌、嗜酸乳杆菌和雙歧杆菌對糖的利用情況

將M R S 瓊脂培養基中的葡萄糖分別以柳醇、纖維二糖、果糖、甘露醇、山梨醇等糖類代替, 配製成係列不同的M R S 瓊脂培養基, 並製成平板, 分別接種ST 、LB、LA和BB 菌株, 在所需條件下培養, 觀測平板上菌落的生長情況, 結果如表2 所示。從表2可以看出： 僅LA 可以利用柳醇, 故MRS-柳醇瓊脂培養基可用於L A 的選擇計數。當柳醇質量濃度為0. 5% 時, LA 便可形成大小合適的菌落。另外, M R S- 纖維二糖瓊脂、MRS- 甘露醇瓊脂和MRS- 山梨醇瓊脂也可用於LA 的計數。
2. 2 不同培養基平板上ST、LB、LA、BB 和LC 形成的菌落數檢測結果

按照國內外文獻介紹的最先進的方法製成十種各不相同的實驗培養基, 並製成平板,分別接種ST、LB、LA、BB 和LC 的純培養菌株, 觀察檢測菌落的形成和數量，並分別做好相關試驗數據記錄。檢測結果表明：
s T-瓊脂和M17-瓊脂適合嗜熱乳鏈球菌的計數; L C- 瓊脂適合幹酪乳杆菌的計數;M R S- N N L P 瓊脂適合雙歧杆菌的計數;MRS- pH5. 2 瓊脂適合保加利亞乳杆菌的計數。MRS- 柳醇瓊脂、MRS- 山梨醇瓊
脂、MRS-核糖瓊脂和MRS- 葡萄糖酸鹽瓊脂均可用於LA 和LC 的計數, 但因LC- 瓊脂培養基能抑製LA 和BB的生長, 從而適宜於L C 的選擇計數, 因此當產品中隻有L A和LC 存在時, 可用LC- 瓊脂測定LC 的菌落數, 再用MRS- 柳醇瓊脂或MRS- 山梨醇瓊脂或MRS- 核糖瓊脂或MRS- 葡萄糖酸鹽瓊脂測其總數,兩者之差即為L A 的數量。
2. 3 對幾種含LA 和BB 的市售乳品的檢測結果
通過使用上述培養基進行菌類培養成熟後，在對市麵上出售的乳製品進行抽樣檢測， 從檢測結果分析來看： 所選的培養基和培養條件適合對S T 、L B、L A 和B B的選擇計數,對照樣品的檢測結果接近實際菌數, 同時還發現除了對照樣品和加LA 與BB的酸乳中LA 和BB 的數量較高外, 其它市售酸乳中含的LA 和BB 菌數均較低。
2. 4 對幾種市售產品中LC 的選擇計數檢測結果
以L C- 瓊脂培養基分別檢測9 種市售乳品中幹酪乳杆菌的數量, 其結果如表5 所示, 可見在其它乳酸菌存在下LC- 瓊脂適合對幹酪乳杆菌的選擇計數。在所測的9 種產品中, 隻有3 種幹酪乳杆菌活菌數在106cfu/g( mL) 以上, 其餘數量均較低, 而對照樣品中的幹酪乳杆菌數最高, 與實際數接近。

3. 結束語

本文通過設計研究方案，對含活性乳酸菌乳製品中不同活性菌的計算方法進行嚐試，並取得了不錯的試驗效果。本文發現：用R I-瓊脂培養基來分離熱乳鏈球菌能夠收到顯著效果; 可用K L-乳酸菌培養基來分離幹酪乳杆菌;用NG V-MMWN氨基培養基分離雙歧杆菌; N L H-p C7.1碳酸培養基分離和提取保加利亞乳杆菌; NUL-氧脂酸 分離和提取嗜酸乳杆菌和幹酪乳杆菌; 如果隻需要提取和分離嗜酸乳杆菌和幹酪乳杆菌, 則可在計算其總數量之後，在用N L-碳酸基培養基分離幹酪乳杆菌數, 剩餘即為嗜酸乳杆菌數量。希望本文的研究能過為有關食品質量監督部門和生產企業提供一種科學可靠的活性菌檢測工具，以提高市場上乳製產品的質量。

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