【原理】
係以傷寒沙門菌H、O,肖氏沙門菌、希氏沙門菌H 為抗原,檢測病人血清中相應抗體的定量凝集反應。
【材料】
病人血清、生理鹽水、傷寒沙門菌“H”及“O”菌液,肖氏沙門菌、希氏沙門菌“H”菌液、小試管、32 孔(4×8)有機玻璃板,0.2ml 微量移液器及移液頭。
【方法】
1.取32 孔有機玻璃板一塊。
2. 吸取生理鹽水0.8 毫升置於小試管中,然後加入0.8 毫升1:10 稀釋的病人血清充分混勻,此時血清稀釋為1:20。
3.取上述稀釋的血清0.8 毫升,分別置0.2 毫升於有機玻璃板每排第一孔內.
4. 吸取0.8 毫升生理鹽水,加於血清釋釋管中,混勻後,此時血清已被稀釋成1:40。
5. 取1:40 稀釋血清0.8 囊升.分別置0.2 毫升於有機破璃板每排第二孔內,以此類推,直至每排第七孔。
6.每排第8 孔不加稀釋血清,加0.2 毫升生理鹽水作為對照。
7. 加傷寒沙門菌“H”菌液0.2 毫升於第一橫排各孔內(從第8 孔開始向前加,下同);傷寒沙門菌“O”菌液0.2 毫升於第二橫排各孔內;肖氏沙門菌 “H”菌液於第三橫排備孔內;希氏沙門菌“H”菌液於第四橫排各孔內。將有機玻璃板加以震蕩,使菌液與血清充分混勻。置玻璃板於42℃孵箱半小時後觀察結果,井記錄凝集效價。
附錄:
1.SS 瓊脂培養基為分離腸道病原菌的強選擇鑒別培養基。其組成成分包括:基礎培養基、乳糖、枸櫞酸鈉,硫代硫酸鈉、枸櫞酸鐵、中性紅、煌綠和膽鹽,其中基礎培養基提供氮和碳源,乳糖在鑒別腸道致病菌和非致病菌上起重要作用,中性紅為指示劑,它在酸性時呈紅色,在堿性時呈淡黃色(PH6.8-8.0,,色調變更紅橙黃)。一般腸道致病菌不分解乳糖,但分解蛋白腖產生堿性物質,所以菌落呈淡黃色,大腸杆菌發酵乳糖時產生酸類,能使指示劑變紅,所以菌落呈紅色,中性紅可為光線破壞,所以應將培養基保存於暗處,其餘成分作為選擇性抑製劑或緩衝鹽。其中枸櫞酸鈉和煌綠對大腸杆菌的生長,菌體蛋白的合成和糖的利用,都有抑製作用,枸櫞酸鈉對致病菌無作用,枸櫞酸鐵對大腸杆菌無抑製作用,但能中和煌綠、中性紅等染料的毒性作用。硫代硫酸鈉能使大腸杆菌的紅色菌落顏色鮮明。膽鹽與構櫞酸鈉合用時,能加強對大腸杆菌的抑製作用。SS 瓊脂培養基,對大腸杆菌的抑製作用很強,對腸道病原菌無抑製作用或抑製作用微弱,因此可以增加標本的接種量,從而獲得對腸道病原菌較高的陽性分離率。
2. 克氏雙糖培養基,下層為含葡萄糖的半固體培養基,可以觀察細菌的動力和對葡萄糖發酵的能力,例如大腸杆菌能發酵葡萄糖產酸產氣,所以下層變黃,且有氣泡存在,同時有動力,細菌沿穿刺線向周圍擴散生長。傷寒沙門菌則分解葡萄糖產酸不產氣,有動力。上層為含乳糖及硫酸亞鐵的固體,主要是觀察細菌對乳糖的發酵情況及產生H2S 的能力,例如大腸道杆菌能發酵乳糖,所以上層斜麵呈黃色,致病性腸道杆菌如傷寒沙門菌及痢疾杆菌等不能發酵乳糖,斜麵不變色,大腸杆菌不產生H2S,故斜麵無黑色;肖氏沙門菌產生H2S 則出現黑色。本培養基以酚紅為指示劑,酸性時為黃色,堿性時為紅色。
3. 伊紅美藍(Eosin Methyi Blue,EMB)瓊脂平板為分離腸道病原菌的弱選擇鑒別培養基。大腸杆菌發酵乳糖產酸,使伊紅與美藍結合成黑色化合物,顯示出紫黑色菌落,周圍有一層白環,病原菌不發酵乳糖,菌落透明無色。
上一篇: 鏈球菌的培養與抗鏈球菌溶血素“O”試驗
下一篇:大腸埃希氏菌的基本特性