凝集試驗
1.玻片法
(1)原理:用已知的診斷血清或血漿在玻片上與待檢菌及生理鹽水混合,若出現肉眼可見的特異性凝集塊,表示該菌即為相應的細菌。
(2) 方法:取一潔淨載玻片,用接種環取待檢菌培養物,分別與診斷血清及生理鹽水混勻,上下搖動玻片數次, 1~3 min 後觀察結果。
(3)結果判斷: 陽性——待檢菌明顯凝集,對照菌均勻混濁。陰性——待檢菌及對照菌均勻混濁。自凝——測定菌、對照菌均凝集(圖3 - 46) 。
(4) 注意事項: 某些細菌菌體表麵常有一層表麵抗原,如傷寒沙門菌的Vi 抗原及誌賀菌屬的K 抗原等。它能阻抑菌體抗原與抗血清的凝集,從而導致假陰性結果。此時應將菌懸液於1000C 中煮沸1 h ,以破壞其表麵抗原,然後再作試驗。
2 . 試管法
此法可排除玻片法凝集試驗的非特異性凝集,是一種半定量凝集試驗。
(1)方法: 取小試管1 0 支,第1 管加入生理鹽水0.45 時,再加入0. 05 ml 診斷血清混勻,其餘各管均加生理鹽水0 . 25 ml ,然後從第1 管中吸出0.25 ml 加入第2 管中,棍勻後再吸出0.25 ml 加入第3 管,依次類推直至第9 管,從第9 管吸出0 . 25 ml 棄去,第10 管不加抗血清為對照管。每管加待檢菌菌液(10 X 109 CFU/ ml)0 . 25ml 時,充分振蕩混勻後,置37℃水浴4 h , 再置4℃中過夜。
(2) 結果判斷:以血清最高稀釋度達到(++)凝集者(管內液體澄清,部分凝集塊沉於管底)為該菌的凝集效價。若此效價達所用原診斷血清效價一半以上者為陽性。
(3) 注意事項: 腦膜炎奈瑟菌的菌液必須經56℃ 30 min 滅活,以破壞自溶酶。若試驗出現低凝集結果時,應將該菌傳代數次後,再做實驗。
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