1.複活菌株
選擇合適的培養基和培養條件(根據生產商說明）進行複活。凍幹菌株的傳代次數不得超過5代，從菌種保藏中心購買的凍幹菌種為第0代。
（1）細菌
用無菌吸管吸0.5ml 液體培養基加到凍幹菌塊上，吹打混勻成懸液，將全部懸液移入含有5ml合適的肉湯培養基中。將管中殘留的幾滴懸液移種到斜麵上。在合適的條件下培養，細菌培養溫度通常為25℃或37℃。多數凍幹菌株會在幾天後長出，但是少數菌會表現出延滯期延長的現象，需要將正常培養時間加倍。
（2）噬菌體
首先應準備18h〜24h的宿主細菌培養物，往凍幹噬菌體中加1.0ml肉湯（視宿主細菌而定)混勻，吸0.1ml懸液到0.9ml肉湯中，依次係列稀釋。每個稀釋度的稀釋液一滴接種到預先準備好的平板上，每平板采用3個〜4個稀釋度。過夜培養後可出現噬菌斑。
（3）黴菌和酵母菌
用無菌吸管吸0.5 ml〜1ml無菌水到凍幹菌塊上，將全部內容物移入裝有5 ml，無菌水的試管中進行複水，2 h（或過夜）後移種到肉湯或固體瓊脂上，在合適的溫度下培養，真菌培養溫度通常是25℃。少數培養物會表現出延滯期延長的現象,需要將正常培養時間加倍。
如菌株在推薦的培養基、培養溫度和時間等適宜的條件下培養不生長，須滅菌處理之後方可丟棄。
2.菌種純度檢査和確認
(1)菌落形態
取複活後的培養物，在相應的鑒別平板或普通非選擇性平板上劃線分離，培養出單菌落，觀察菌落形態是否符合，同一平板上的單菌落的大小、形狀、顏色、質地、光澤等是否相似；對於出現兩種或以上形態的菌株，應再分別挑取單菌落劃線或稀釋塗布培養，檢測是否重複出現相同特征。
（2）細胞形態
對數生長期的培養物的革蘭氏染色反應應呈現一致性；細胞形狀、大小、鞭毛、莢膜等特征應相似。
（3）芽孢大小、位置、形狀
形成芽孢的菌種，其芽孢大小、位置、形狀應相似。
（4）生化鑒定
必要時進行生化鑒定等實驗。
(5)汙染處理
如發現菌種有汙染，需要分離挑選目標菌株培養成功後將汙染培養物做滅菌處理。
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