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細菌革蘭氏染色



錄入時間:2015-3-24 10:38:05 來源:青島betway必威西汉姆联生物

 

一、目的

了解細菌革蘭氏染色原,並掌握其方法。

二、原理

氏染色法是一種要的鑒別細菌的方法根據各種細對這種染色法的反應不同,可把細菌分為革蘭氏陽性和蘭氏陰性兩類。因此,該方法對於細菌的分類鑒定及生產應用都有重要意義。其染色原理是利用細菌的細胞壁組成成分和結構的不,革氏陽性菌的細胞壁肽聚糖層厚,交聯而成的肽聚糖網狀結構致密,經乙醇脫色處發生脫水作用,使孔徑縮小,能降低,結晶紫與碘形成的大分子複合物保留在細胞內而不被脫色,結果使細胞呈現紫色;而革蘭氐陰性菌肽聚糖層薄,網狀結構交聯少,脂類含量較高,經乙醇處理後脂類被溶解,細胞壁孔徑變大,通透性增加結晶紫與碘的複合物被溶出細胞壁,使細胞脫色。此時,再經複紅或沙黃等色染料複染細胞紅色。

在革蘭氏染色中,有兩個值得注意的問題。一是酒精脫色的時間要掌握恰當隨塗
不同,脫色的時間也不完全一樣,一般以溶出色素為止。若脫色過度則陽性菌被誤染為陰性菌而脫色不夠時陰性則被誤染為陽性。二是培養物的老幼對染色結果也有影響,革蘭氏染色檢查的菌,必須是新培養物

三、材料

1.菌種 培養10~12h枯草杆菌及大腸杆菌

2.儀器及其他 微鏡、接種環、精燈、載玻片、玻片架、75%酒精消缸、鑷子、無菌水、草酸銨結晶紫、Lugol氏碘液、95%灑精、蕃紅染液、吸水紙、特種蠟筆。

四、方法與步驟

1.塗片 塗片、燥、定同簡單染色法。

2.初染 滴加草酸銨結紫於塗部位染色時間1min
3.水洗 用水輕輕衝洗,洗去多餘的染料。
4.滴加Lugol氏碘液1~2min,紫色部分變黑為止。
5.水洗 傾去Lugol氏碘液水洗。

6.脫色 滴加95%以上的酒,約3060s (色素不溶出為止)
7.水洗 同5水洗 

8.複染 滴加蕃紅或沙黃染1~2min
9.水洗 同5水洗。

10.幹燥 自然幹燥或用吸水紙吸幹。

11.鏡檢 用油鏡觀察,記錄結果。

 

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