1 一般要求
正確製備培養基是微生物檢驗的最基礎步驟之一，使用脫水培養基和其他成分，尤其是含有有毒物質（如膽鹽或其他選擇劑）的成分時，應遵守良好實驗室規範和生產廠商提供的使用說明。培養基的不正確製備會導致培養基出現質量問題（見附錄A）。
使用商品化脫水合成培養基製備培養基時，應嚴格按照廠商提供的使用說明配製。如重量（體積）、pH、製備日期、滅菌條件和操作步驟等。
實驗室使用各種基礎成分製備培養基時，應按照配方準確配製，並記錄相關信息，如：培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、製造商、批號、pH、培養基體積（分裝體積）、無菌措施（包括實施的方式、溫度及時間）、配置日期、人員等，以便溯源。
2 水
實驗用水的電導率在25℃時不應超過25 μS/cm(相當於電阻率≥0.4 ΜΩcm)，除非另有規定要求。
水的微生物汙染不應超過103 CFU/mL。應按GB 4789.2，采用平板計數瓊脂培養基，在36 ℃±1 ℃培養48 h±2 h進行定期檢查微生物汙染。
3 稱重和溶解
小心稱量所需量的脫水合成培養基（必要時佩戴口罩或在通風櫃中操作，以防吸入含有有毒物質的培養基粉末），先加入適量的水，充分混合（注意避免培養基結塊），然後加水至所需的量後適當加熱，並重複或連續攪拌使其快速分散，必要時應完全溶解。含瓊脂的培養基在加熱前應浸泡幾分鍾。
4 pH 的測定和調整
用pH計測pH，必要時在滅菌前進行調整，除特殊說明外，培養基滅菌後冷卻至25 ℃時，pH應在標準pH±0.2範圍內。一般使用濃度約為40 g/L（約1 mol/L）的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5 g/L（約1 mol/L）的鹽酸溶液調整培養基的pH。如需滅菌後進行調整，則使用滅菌或除菌的溶液。
5 分裝
將配好的培養基分裝到適當的容器中，容器的體積應比培養基體積最少大20%。
6 滅菌
6.1 一般要求
培養基應采用濕熱滅菌法或過濾除菌法。
某些培養基不能或不需要高壓滅菌，可采用煮沸滅菌，如SC肉湯等特定的培養基中含有對光和熱敏感的物質，煮沸後應迅速冷卻，避光保存；有些試劑則不需滅菌，可直接使用（參見相關標準或供應商使用說明）。
6.2 濕熱滅菌
濕熱滅菌在高壓鍋或培養基製備器中進行，高壓滅菌一般采用121 ℃±3 ℃滅菌15 min，具體培養基按食品微生物學檢驗標準中的規定進行滅菌。培養基體積不應超過1000 mL，否則滅菌時可能會造成過度加熱。所有的操作應按照標準或使用說明的規定進行。
滅菌效果的控製是關鍵問題。加熱後采用適當的方式冷卻，以防加熱過度。這對於大容量和敏感培養基十分重要，例如含有煌綠的培養基。
6.3 過濾除菌
過濾除菌可在真空或加壓的條件下進行。使用孔徑為0.2 μm的無菌設備和濾膜。消毒過濾設備的
各個部分或使用預先消毒的設備。一些濾膜上附著有蛋白質或其他物質（如抗生素），為了達到有效過濾，應事先將濾膜用無菌水潤濕。
6.4 檢查
應對經濕熱滅菌或過濾除菌的培養基進行檢查，尤其要對pH、色澤、滅菌效果和均勻度等指標進行檢查。
7 添加成分的製備
製備含有有毒物質的添加成分（尤其是抗生素）時應小心操作（必要時在通風櫃中操作），避免因粉塵的擴散造成實驗人員過敏或發生其他不良反應；製備溶液時應按產品使用說明操作。
不要使用過期的添加劑；抗生素工作溶液應現用現配；批量配製的抗生素溶液可分裝後冷凍貯存，但解凍後的貯存溶液不能再次冷凍；廠商應提供冷凍對抗生素活性影響的有關資料，也可由使用者自行測定。
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