51、微生物檢驗驗證時，如我用一瓶普通脫水培養基與對照培養基測定菌落數，如普通脫水培養基符合適用性檢查，那麽該瓶普通脫水培養基能否作為以後工作中的對照培養基來用？
答：請看上一題的解釋。
52、培養時間有要求24~48h，也有要求24~72h的，像這種時間要求範圍比較大的情況，如果在最短的時間內（如：24h）就已經長菌，但需進行後續實驗判斷該菌是否為控製菌，那麽，是否需要培養到最長時間（如：48h或72h）再進行後續實驗？
答：長勢好的話可以進行後續實驗不用等到最長時間。
53、操作結果的RSD%的範圍比較寬裕，是否可信？（eg：黑曲黴若＞20cfu∕皿時，菌落將擴散至難以分離，所以回收率精確度較低）
答：這個問題要具體問題具體分析。菌落漫延，這是要求逐日觀察的主要原因之一，應在菌落能分辨的時候點計菌落數。加菌量太少，容易出現誤差大，重現性差，所以要求加的菌數在50~100cfu。
54、含藥材細粉的膠囊如何製備供試液？答：按固體製劑供試液的製備方法製備，可用45℃水浴軟化溶解膠囊殼。55、大腸菌群檢查，需陽性對照嗎？
答：要的。陽性對照菌為大腸埃希菌。
56、菌液塗布時，用接種棒還是塗布棒塗？
答：用L型塗布棒，也可用玻棒自製。
57、控製菌的培養基促生長能力檢查，對照菌加於固體培養基如何塗布，用什麽工具來塗布？
答：請看上一題。
58、三部藥典中有些產品細菌數、黴菌和酵母菌數用每g多少cfu，但有些為每g多少個，應怎樣記錄？
答：應該是cfu才對的，這些應該是在轉版時沒轉過來吧，在增補本應該會轉過來。但是在沒轉過來之前，它還是法定的，必需按藥典上的寫法來執行。
59、如樣品的控製菌為大腸埃希菌沒檢出，但檢出其它種菌，結果該怎樣判定？
答：如果是其他致病菌，請看微生物限度檢查法的結果判斷第一句。
60、我們是做糖衣片的，微生物限度檢查吸取供試液時，吸管有時會被粉末塞住，那能不能讓供試液沉澱後取其上清液呢？這樣操作結果可靠嗎？
答：請將藥片盡可能打碎，如果還不能解決問題，我們的經驗是：可讓大藥渣沉降後取上層液進行試驗，但沉降時間盡可能短(在3-5分鍾內)，這樣做對結果會有一定影響，但應該在可接受範圍內。
61、微生物限度檢查控製菌檢查時，如供試液的增菌後無菌生長，可否直接發供試液的未檢出控製菌，此時，陽性對照試驗還需繼續做下去嗎？
答：隻要能判定供試液增菌後無菌生長，陽性對照試驗菌長出，就可發未檢出控製菌。
62、如何理解“菌落蔓延成片不以計數”？如10-1級有1個皿的菌落成片是否用10-2級來計數？
答：是的。
63、如何避免菌落成片？
答：1、培養基傾注時溫度不宜過高，可減少傾注後培養皿裏的水蒸汽太多而造成菌落容易漫延，或者加蓋“陶瓦蓋”吸收水蒸汽；2、細菌計數時，在每100ml營養瓊脂培養基中加入滅菌的1%氯化四氮唑0.1ml，可使生成的菌落變紅色，容易點計，也可在一定程度上抑製菌落漫延。
64、請問一下對於生長速度快、易蔓延的菌有什麽好的方法控製，該如何計數，如采用陶瓦蓋培養時間要不要延長？
答：請看上一題的說明。如用陶瓦蓋，培養時間不需要延長。
65、請問若細菌、酵母菌平均菌落數不在其宜選取的範圍內，即大於300及100cfu時，該如何報告菌數？另05版藥典的規定範圍是30~300/30~100，倘若當菌落數大於300及100，如何報告？
答：應該重新試驗，將稀釋級再往高級進一步稀釋，直到能有可報告的稀釋級。可在工作中以對產品的認識將稀釋級調整到可報告的級別進行檢驗。
66、請問對於抑菌性難以消除的粉末狀樣品，采用最好的消除抑菌性的方法是什麽？
答：如果能溶於水，目前來說，最好的除菌方法是薄膜過濾法；其次是找到相應的中和劑。
67、我們生產的產品為外用搽劑非無菌產品，需要對所有原輔料做微生物限度檢查嗎？
答：生產企業對原輔料的微生物限度檢查，應根據自己的情況進行控製。參見一部附錄P88（或二部附錄P116），微生物限度標準 第7點。（個人意見：如果所用的原輔料直接投料，就要控製，如果還要進一步提取等，則可通過控製中間產品的微生物限度來控製。）
68、原輔料是否要單獨做方法驗證？
答：所有要檢查微生物限度的品種（當然包括原輔料），都要做方法驗證。
69、中藥材的微生物限度如何檢測？如超標應如何控製？
答：1.中藥材的微生物限度檢查，參照固體製劑的供試液製備，並根據給藥途徑執行標準，如用於直接投料至口服製劑的，還應檢大腸菌群。2.如超標，具體問題具體分析。
70、中間產品可否不做微生物檢測？
答：中間產品應該控製微生物限度，各企業應內部質控相關的具體要求。
71、廠家用10-2稀釋級作驗證，那我們藥檢所作檢查時是否從10-2稀釋級開始做？
答：是的。
72、省所做微生物限度時，廠家沒有做驗證，那省所是自己做驗證，還是退回去？又或者廠家的控製菌驗證沒有做全（例如漏了沙門菌沒做），那省所怎麽處理？
答：1、如果是注冊檢驗，廠家沒有做驗證，我們是不會接收樣品的，也就是說，沒做驗證或驗證不全，肯定退回去。 2、如果是委托檢驗，由於是協議性質，我們就按協議進行檢驗。7
73、微生物限度檢查時，隻有細菌數不合格，那麽複試是否可以隻做細菌數檢查就行了？
答：可以。
74、樣品製備中，如羧甲澱粉鈉等崩解劑遇水膨脹，經試驗1g∕100ml仍為膠體漿糊狀，無法過濾且難與培養基融合，再加大稀釋倍數，則代表量太少，請問這種輔料采用何種方法進行微生物限度檢查？
答：羧甲澱粉鈉應該沒有抑菌作用，無法過濾可用平皿法進行檢查，且供試液製備時，稀釋劑的溫度適當調低些。
75、若樣品對微生物生長有促進性，采用薄膜過濾法應如何消除此影響，或者有什麽其他方法可以消除促進性以獲得更準確結果？
答：采用薄膜過濾法就是很好的消除影響的方法；藥典上規定“供試液從製備到加入檢驗用培養基不得超過1個小時”，就是考慮到樣品對微生物存在促進或者抑製作用的影響。因此要獲得更準確的結果，就必需盡量縮短從供試液的製備到加入培養基的時間。另外，也可根據樣品的特性有針對性的加入中和劑等。
76、控製菌檢查對於大腸的檢查，MUG試驗中顯陽性或難以判斷時，“將培養液轉接到EMB”，這裏的培養液是指MUG還是之前擴增的BL？
答：藥典上並沒有“將培養液轉接到EMB”這一描述。但對於MUG和靛基質試驗結果不一致時，是這麽規定的：“如MUG 陽性、靛基質陰性，或MUG 陰性、靛基質陽性，則應取膽鹽乳糖培養基的培養物劃線接種於曙紅亞甲藍瓊脂培養基或麥康凱瓊脂培養基的平板上，培養18～24 小時。”
77、膽香鼻炎含有豬膽汁膏，毛雞藥酒含有毛雞浸出夜，霍膽丸含豬膽粉，這三個產品需要檢沙門菌嗎？
答：是的。（因含豬膽汁膏、毛雞、豬膽粉）。
78、微生物檢驗時，勻漿機應把轉速調到多少才不會對微生物有損傷？
答：沒有相關的規定，目前一般使用轉速為3000-4000轉/分鍾。
79、如果使用藥典以外的培養基進行微生物限度檢查（比如TSA），怎麽進行培養基適用性檢查，是否有合適的對照培養基？
答：可以參照“藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則”對所用培養基的質量進行控製。至於是否有相應的對照培養基，要看中檢所是否來得及研製。
80、微生物限度檢查的方法驗證，至少應進行3次獨立平行試驗，每個獨立平行試驗可否使用不同批號的樣品？
答：可以，且最好是用3個不同批號樣品進行驗證。
81、每個獨立的平行試驗是否有必要用3個不同批號的樣品進行驗證？
答：用3個不同批號的樣品進行驗證，可以增加驗證結果的重現性。
82、微生物限度檢查中，培養基的適用性檢查時對每個批號的培養基進行還是對每次製備好的培養基進行？
答：請看《藥品微生物實驗室規範指導原則》中，關於培養基第3點，質量控製試驗的描述：“除藥典附錄另有規定外，在實驗室中，若采用已驗證的配製和滅菌程序製備培養基且過程受控，那麽同一批脫水培養基的適用性檢查試驗可隻進行一次。如果培養基的製備過程未經驗證，那麽每一批培養基均要進行適用性檢查試驗，試驗的菌種可根據培養基的用途從相關附錄中進行選擇，也可增加從生產環境及產品中常見的汙染菌株。”
82、能否舉例說明哪些培養基是指示能力檢查培養基？
答：請看“微生物限度檢查法”中表2。
84、05版SOP中有說經驗證後控製菌可以不用做陽性對照，10版是否有相同的說法？已建立控製菌方法是否還需作陽性對照？
答：藥典規定，控製菌檢查必需同時檢查陽性對照和陰性對照。05版SOP《中國藥品檢驗標準操作》中並沒有說經驗證後控製菌可以不用做陽性對照，不知你所說的是那個SOP？
85、請問化藥軟膠囊還需要檢沙門菌嗎？
答：如果是口服製劑、有動物藥投料就必需檢查。
86、微生物方法驗證過程中，供試液的製備，檢細菌與黴菌及酵母菌處理不一樣，這樣方法是否能成立？
答：完全有可能。檢查方法是經驗證的，對於有抑菌作用的品種，經驗證後細菌計數方法與黴菌及酵母菌的檢查方法不一樣，這很正常，隻要方法是經驗證，符合藥典要求就可以。
87、2010版藥典控製菌培養溫度降低到30~35℃，那麽以2005版藥典驗證過程控製菌檢驗方法，2010版藥典還需要再驗證嗎？
答：是的。
88、檢大腸埃希菌時，MUG觀察一定要5小時觀察，是否可以隻在24h觀察？
答：可以。
89、培養基適用性檢查塗布時如何考慮（或消除）塗布棒上沾到菌落的影響？
答：塗布時，試驗用培養基與對照培養基都同樣操作，所以這個影響是同等的，可不需考慮。
90、純化水要多少ml過濾，是不是原液要不要衝洗液衝洗？要不要陰性對照？
答：過濾多少ml可根據樣品微生物汙染的程度來決定，隻要最終每膜上的菌落不超過點計要求（即100cfu）就行了，結果報告時將菌落數除以ml數即可。可以不用衝洗。必需做陰性對照。
91、用稀釋法檢驗控製菌的時候，金黃色葡萄球菌是10ml（相當1g，1ml）至500ml肉湯，能否用2ml至100肉湯？
答：可以，但應該同時做5份，使檢驗用的樣品總量達到1g（或1ml）。
92、保留2倍有效數字（細菌，黴菌報告數）如果檢出細菌是1160cfu/g，是否報告數必須寫成1.1*103cfu/g，還是直接寫1/100（不過這樣好像不是2倍有效數字）。
答：報告數應該寫成1.2Χ103cfu/g或1200cfu/g。
93、怎麽證明微生物限度中加入的表麵活性劑，中和劑或滅活劑的生長和存活無毒性？是在驗證中做稀釋劑對照組就可證明是否其無毒性了嗎？還是？
答：是的，在驗證中做稀釋劑對照組就可證明是否其無毒性。
94、平皿稀釋法時，若每一個平皿加入0.5ml供試液，那麽，陰性也是加0.5ml嗎？還是陰性加1ml？
答：陰性是檢驗檢測係統是否受微生物汙染的試驗，應該是取1ml稀釋液。
95、輔料中的香精（如楊梅香精），滑石粉是否按非水溶性製劑供試品處理？氫氧化鈉又如何處理呢？
答：香精和滑石粉，如果能分散於水中，或者加表麵活性劑後能分散於水中就可以，不一定非要按非水溶性製劑製備供試液。氫氧化鈉可溶於水，可按普通檢品檢驗進行驗證處理。
96、有兩種製劑形式的原料藥該如何製定衛生學指標呢？如一種原料藥可用於口服製劑以及外用製劑？
答：可以按要投料的劑型進行控製，或者直接按要求嚴格的一種來要求。
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