這篇的廠房設施寫的重點不在設施改造，更著重於微生物實驗室的廠房設施所創造的實驗環境如何符合15版藥典的管理要求。
在15版藥典的指導原則中有兩份指導原則有所提及，分別是9203《藥品微生物實驗室質量管理指導原則》中的“環境”項下及9205《藥品潔淨實驗室微生物監測和控製指導原則》的內容。
一、 微生物實驗室的布局
實驗室布局的基本原則是既要最大可能防止微生物的汙染，又要防止檢驗過程對環境及人員造成危害。通常，實驗室按功能劃分為潔淨區、活菌操作區和其他功能區，同時應根據實驗目的，在時間和空間上有效分隔各類實驗活動，將交叉汙染的風險降到最低。
1、 潔淨區
一般微生物實驗室的潔淨區設置有微生物限度檢查潔淨室及無菌檢查潔淨室，兩個實驗區域的空調係統應獨立，微限操作有一定菌數數量級的樣品，無菌操作有無菌的樣品，本身實驗概念上不同，必須設置專屬的工作區域。
微生物限度檢查潔淨室的潔淨級別藥典要求是不低於D級背景下的B級單向流空氣區域內進行，一般大家還是喜歡使用超淨台作為實驗台，根據10版藥典的規定，實驗室內微限室是達到C+A的水平，個人建議可以將微限室降級為D級潔淨室，但是其空調係統的配製可達到C級淨化水平，因為一方麵更多的企業選擇在無菌檢查使用隔離器，也就是無菌檢查室會傾向使用控製級別較低的D級潔淨背景管理，便於統一管理；另外D級潔淨室比C級的風量及相應的換氣次數要低，可以降低能耗，節約潔淨區運行成本。
在D級潔淨室內置上超淨台或生物安全櫃均可，個人傾向生物安全櫃，這也是中檢所老師推薦的，理由就是既保護樣品又保護實驗人員，舉個例子，有個公司的超淨台是平流式的，正好生產的是促進胃動力的藥品，生產車間使用超淨台對產品進行操作的人員每天中午的飯量都很大，最後調查因為吸入藥品粉末所致，其實這樣的藥品對於人並不算有太大影響，但是如果配製垂直流的生物安全櫃並做成室外排風，那這樣是不是更人性化呢，當然檢品到實驗室這一道其檢驗量原本就不多，對實驗人員一般不會帶來什麽，但我更相信，在這樣更科學化人性化的管理理念下，實驗人員也會更認真的處理檢品，這不就是企業希望帶來的結果嗎。
無菌檢查室的級別要求是應在B級背景下的A級單向流潔淨區域或隔離係統中進行，之前說了現在更多的企業傾向於購買隔離係統，讓C級的潔淨室改造成B級的潔淨室也不是那麽容易的，更何況隔離係統更能夠避免實驗假陽性的發生，無菌檢查實驗通常是放行的最後時限也是無菌製劑放行時的相當重要的參考數據之一，而且也是出現陽性結果原因非常難查的實驗之一，我個人也推薦大家使用隔離器，但是一定要注意必須進行嚴格係統的驗證，避免假陰性情況出現，寧可錯殺一千不能放過一個陽性檢品啊！！！
背景的話在9206《無菌檢查用隔離係統驗證指導原則》中指出“無菌檢查用隔離器安裝環境的潔淨度要求建議不低於我國現行GMP中D級空氣潔淨度要求，安裝隔離器的房間應限製無關人員出入”，其實之前的一稿是堅持必須在D級背景下的，但是第三稿已經做了讓步了，國家已經在非常大的與國外法規做對接了，不過我覺得在現在的國情下可謂是大膽的推進，也是對國內企業極大的信任。按其要求，可在非潔淨環境背景中設置隔離係統，但是必須限製無關人員出入，同時該房間至少也要滿足幹淨整潔，不堆積無關物品等要求。個人還是建議至少置於D級背景下比較靠譜，第一、是出於對隔離器HEPA使用壽命的考慮；第二、在潔淨背景下控製也是保證隔離器滅菌效果穩定（某些滅菌劑需室內溫濕度穩定）；第三、使用潔淨環境，是控製和降低樣品等進入隔離器之前其外表麵生物負荷的長期有效措施。
2、 活菌操作區
在活菌操作區內會進行很多操作，如檢驗菌種的複蘇/傳代/保藏等、汙染菌的分離/鑒定/保藏等、還有就是很重要的微生物的方法學驗證。這些實驗當中都會接觸和處理一些活體的微生物，處理不當會造成實驗室的環境汙染，可能還會影響其他實驗結果。該區域應包含菌種的存放區域、培養區域和滅菌清潔區域，不得將汙染活體的物品帶出該區域。
活菌操作區應該設置門禁或嚴格控製人員進出，這個在之前的菌種那篇文章中有相關BSL-2級實驗室的介紹，同時在操作活菌的區域一般裏麵會配備生物安全櫃，安全櫃級別按操作的菌種等級進行配備，該操作室相對於普通房間應為負壓，順便提一句題外話，該區域生物安全櫃的定期驗證應由衛生局認可的有資質的第三方公司進行確認。
在該區域中有冰箱、培養箱和滅菌器等散熱設備，應考慮設置空間或設置物理隔斷；另外因滅活菌種會散發異味，故應考慮房間的通風設施；在外部的普通實驗室可考慮安裝紫外燈定期對外部環境進行消毒，避免傳遞過程可能帶出活菌操作室的微生物帶來的影響，這就和醫院的輸液室定期使用紫外燈消毒差不多。
3、 其他功能區
在一些微生物實驗室內還會配有樣品貯存區、準備區、培養室等，但很多現實情況是功能區無法區分的很明顯，所以在同一區域可以使用5S等管理的手法進行功能區內設備物品的定置定位，雖然無法在空間上分隔功能區，但是在視覺上可以有效指導人員進行功能區分。
準備區一般進行洗消、配製和滅菌等工作，必須配備純水係統、滅菌器及部分櫃子等硬件，同時應在區域上區分待清潔、已清潔和已滅菌的區域，避免實驗中使用到不符合要求的物品。
檢品的培養區域一般和觀察區域是在一起的，建議觀察區應找一處明亮處，並設置暗背景和白背景各一，便於液體培養物檢驗結果的觀察；同時在我們實驗室也配備普通放大鏡、機械的菌落計數器（即下部有明亮背景可使平板底部透光，上端有燈加觀察的正常倍數的鏡片及放大鏡片）及自動菌落計數器（置於觀察室內，室內有下光源和側光源，並有高像素相機，軟件連接電腦觀察）便於平板樣品的觀察。
這裏特別提一下的是，培養基等所謂“幹淨”的物品絕對不能與帶菌種的物品貯存於同一冰箱，也建議不置於同一區域，一定要避免交叉汙染的可能！
二、各功能區的環境監測及日常控製
1、 環境監測
潔淨區的環境監測手法和頻次指導原則上已經寫的很明確了，挑一些重點的和現在大家都有些爭議的點進行探討。
1） 監測平板
浮遊菌、沉降菌及表麵微生物使用何種培養基進行監測，是否一定要TSA測一下然後SDA再測一下，如果僅使用TSA，那培養溫度和時間如何規定，這個是很多人在培訓潔淨區監測時候會向老師提的問題。這裏我就匯總一下各公司的做法，僅供大家參考，其實這個問題我也問了不下五次，沒有標準答案，隻是需符合各企業的環境監測要求即可。
關於是否使用SDA的問題。企業一，每次TSA和SDA並行，全部房間都做，但是兩種平板上未檢出過真菌；企業二，經風險評估，因在TSA上真菌也可生長，且在日常監測中幾乎捕捉不到真菌，故在日常監測時，對於關鍵房間2種培養基都使用，在非關鍵房間僅使用TSA，但若在檢測過程中，發現僅使用TSA檢測的非關鍵房間生長真菌，則應在本次檢測中使用SDA再次進行監測，並在後續的監測中使用2種培養基進行觀察；企業三，經風險評估，因在TSA上真菌也可生長，且在日常監測中幾乎捕捉不到真菌，故僅在梅雨季節的三個月的環境監測中，加入SDA進行黴菌的控製，但若在檢測過程中，發現僅使用TSA檢測的期間有潔淨室生長真菌，則應在本次檢測中使用SDA再次進行監測，並在後續的監測中使用2種培養基進行觀察。三個方案都有企業使用，當然前提是企業真菌無檢出或極少，若一直有真菌檢出那肯定不可能舍棄SDA，同時肯定要徹查潔淨室，如黴菌汙染是相當棘手的問題。個人覺得使用風險評估的手段對於選擇培養基還是很好的方法，若不使用SDA還是應有一段時間的實驗數據作為依據，不太建議依理論行事，因為每個企業所處的地理環境、生產的藥品及潔淨區內的情況不一樣，所以還是得依據實際情況判斷。
關於僅使用TSA的培養溫度和時間的問題。若既使用SDA，又使用TSA，問題很好解決，TSA在30~35℃培養3d。但不使用SDA僅使用TSA，大家就有爭議了。企業一，僅使用TSA，先置於30~35℃培養3d，再置於20~25℃培養2d；企業二，僅使用TSA，先置於20~25℃培養3d，再置於30~35℃培養2d；企業三，僅使用TSA，置於30~35℃培養5d。很多企業使用的是企業一和企業三的做法，因為本來TSA就可以支持真菌生長，而且TSA本來就是培養需氧菌總數的培養基，個人也覺得這2種做法均可，也相對合適。
這裏還要提一句的是，如果之前使用2種培養基，在SDA捕捉到的真菌無法在TSA上按企業規定的培養條件和時間生長的話，且確認該類菌是潔淨室環境監測過程中時常會出現的菌，不應取消SDA的監測。
另外，做動態沉降菌使用的平板，如果要放置4h，請實驗室進行驗證，如在超淨台層流下放置幾個時間點，再進行適用性檢查確認其是否符合規定，一般是無法放置4h的，培養基會失水，某些菌的回收率就無法達標。
2） 表麵微生物監測方法
表麵微生物的監測一般是在對設備和人員或者是不規則表麵進行微生物監測的情況下使用，其監測的方法有接觸碟法和擦拭法。不知道有沒有實驗室去挑戰過這2種方法的回收率，反正我們實驗室挑戰過，結果嘛。。。真的是慘不忍睹，而且真的沒有規律可言。
這是非常無奈但是也是現實問題，我們企業位於上海，我谘詢過知名外企，他們給我的回答是這不可能做到50-200%的回收率，如果檢查官員問這個問題的話，他們的回答是請您給我一個方法教我做這2個方法的回收率。對於這樣的回答我隻能說太牛X了！我怎麽就沒想到呢！不過打死我我都想不到還能這樣回答問題的。。。但是我們企業就是個不認死理的主，在我們質量總監堅信科學理念的堅強領導下，我們實驗室就接下了這活，最後結果真的就是沒法分析沒法看啊，最後找了PDA的資料去做總結，也是苦了我們的驗證主管。不過這也是所謂的用事實說話了，總比沒有數據隻看書的強！
這裏想提的就是，如果使用表麵微生物監測方法的話，一定要記得，你取到的微生物真的隻是冰山一角！而且那回收率還不是穩定的！接觸碟的有效接觸麵積哪來的25 cm2，隻有23.6 cm2好不好！所以又少了吧！如果你采樣的數值已經接近不合格限，你自己考慮考慮吧！
3）警戒限和糾偏限的製定
有的企業使用50%和80%的合格限製定，有的企業整理曆史數據再使用統計學的方法進行製定，這裏沒有統一的標準，但是當你製定好企業的警戒限或糾偏限時，後續的監測永遠不會踩限或頻頻踩限，那製定的限度值就應當重新考慮。同時應定期整理曆史數據，適時的調整警戒限及糾偏限，讓其更趨於實際，起到幫助企業控製環境的效果。
A級（超淨台或隔離器）的所有踩限的問題均必須要進行調查，同時應注意雖未踩限但其過程中的趨勢變化。
2、 日常控製
實驗室的日常控製基礎的我就不羅嗦了，隻描述一些比較容易忽略和需要強調的點。
潔淨區和活菌操作區的物品絕對不能混用，一樣的東西配兩套，這錢不能省，兩個潔淨室內的物品也不應混用，傳遞過程中容易引入汙染。
實驗室控製限員非常重要，一般的微生物潔淨室或陽性室都不會太大，更衣時盡量保持一人更衣，即使2個人一起進入做實驗，也規定要一人更衣完畢，再允許第二人更衣進入；檢查室即實驗房間的人數越少越好，能一人操作的實驗絕不兩人操作，如果擔心實驗中遇到問題，一人描述的事件重現性不好，可以安裝攝像頭控製；設備維修或其他人員需進入必須得到領導允許，且建議微生物室人陪同進入，因為我們每次都會進一個所謂“外來人員”我們都要再打掃一遍，真的是風險不是潔癖！
現在有很多實驗室還使用手泡消毒液然後再進入，我們實驗室考慮到女孩子比較多，就引入了含護膚成分的手消毒凝膠，一方麵可以有效降低裸手上的微生物量（需進行實驗確認），另一方麵因為成分多數為醇類殘留較低，同時也避免了使用裸手浸泡消毒液或噴酒精而對皮膚的傷害（有的甚至脫皮，反而不利於潔淨室顆粒和微生物的控製）。
使用消毒劑對潔淨室或陽性室進行消毒或熏蒸，盡量選擇氣味適宜的消毒劑，若實在無法馬上變更，則應為清潔人員配備相應的口罩，讓其在清潔消毒時呼吸到正常氣味的空氣，否則肯定影響消毒效果。
應定期對潔淨室及陽性室內的設施進行檢查，因日常不會有設備部同事進入，所以我們必須有相關的意識去找出問題維護好實驗室，如矽膠脫落、不鏽鋼生鏽、紫外燈或照明燈不亮等情況。
微生物實驗室的實驗環境日常都是靠我們微生物實驗室的人員進行整理和維護的，因此把我們的實驗環境變得幹淨整潔有序並受控，是方便我們日常的實驗操作，降低實驗差錯，提高實驗的準確率的有效途徑。借著15版藥典升級的契機，我們可以對我們一直待慣的實驗室進行一次大掃除和大整頓，使其更符合我們的使用要求，更好的為我們服務。
