一、目的要求
1. 證明實驗室環境與體表存在微生物。
2．比較來自不同場所與不同條件下細菌的數量和類型。
3．觀察不同類群微生物的菌落形態特征。
4．體會無菌操作的重要性。
二、基本原理
平板培養基含有細菌生長所需要的營養成分，當取自不同來源的樣品接種於培養基上，在適宜溫度下培養1～2d內每一菌體即能通過很多次細胞分裂而進行繁殖，形成一個可見的細胞群體集落，稱為菌落。每一種細菌所形成的菌落都有它自己的特點，例如菌落的大小，表麵幹燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質地疏鬆或緊密等。因此，可通過平板培養來檢查環境中細菌的數量和類型。
三、器材
l．培養基 肉膏蛋白腖瓊脂平板。
2．儀器或其他用具 無菌水，滅菌棉簽(裝在試管內)，接種環，試管架，酒精燈或煤氣燈，記號筆，廢物缸。
四、操作步驟
每組在“實驗室”和“人體”兩大部分中各選擇一個內容做實驗，或由教師指定分配，最後結果供全班討論。
l．寫標簽
任何一個實驗，在動手操作前均需首先將器皿用記號筆做上記號，寫上班級、姓名、日期，本次實驗還要寫上樣品來源(如實驗室空氣或無菌室空氣或頭發等)，字盡量小些，寫在皿底的一邊，不要寫在當中，以免影響觀察結果。
培養皿的記號一般寫在皿底上。如果寫在皿蓋上，同時觀察兩個以上培養皿的結果，打開皿蓋時，容易混淆。
2．實驗室細菌檢查
(1)空氣 將一個肉膏蛋白腖瓊脂平板放在當時做實驗的實驗室，移去皿蓋，使瓊脂培養基表麵暴露在空氣中；將另一肉膏蛋白腖瓊脂平板放在無菌室或無人走動的其他實驗室，移去皿蓋。lh後蓋上兩個皿蓋。
(2)實驗台和門的旋鈕
①用記號筆在皿底外麵中央畫一直線，再在此線中間處畫一垂直線，如圖27-l。
②取棉簽 左手拿裝有棉簽的試管，在火焰旁用右手的手掌邊緣和小指、無名指夾持棉塞(或試管帽)，將其取出(圖27-2，B)，將管口很快地通過煤氣燈(或酒精燈)的火焰，燒灼管口；輕輕地傾斜試管，用右手的拇指和食指將棉簽小心地取出(圖27-2，C)。塞回棉塞(或試管帽)(27-2，D)，並將空試管放在試管梁上。
③弄濕棉簽 左手取滅菌水試管，如上法撥出棉塞(或試管帽)並燒灼管口，將棉簽插入水中，再提出水麵，在管壁上擠壓一下以除去過多的水分，小心將棉簽取出，燒灼管口，塞回棉塞(或試管帽)，並將滅菌水試管放在試管梁上。
④取樣 將濕棉簽在實驗台麵或門旋鈕上擦拭約2cm2的範圍．
⑤接種 在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿開啟成一縫．再將棉簽伸人，在瓊脂表麵頂端接種，即滾動一下，立即閉合皿蓋。並按圖27-2E和F，將原放棉簽的空試管撥出棉塞(或試管帽)，燒灼管口，插入用過的棉簽，將試管放回試管架。
⑥劃線 另取接種環在火焰上滅菌，按圖3—3方法進行劃線，整個劃線操作均要求無菌操作，即靠近火焰，而且動作要快。
3．人體細菌的檢查
（1）手指(洗手前與洗手後)
①分別在兩個瓊脂平板上標明洗手前與洗手後(班級、姓名．日期)。
②移去皿蓋，將未洗過的手指在瓊脂平板的表麵，輕輕地來回劃線，蓋上皿蓋。
③用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中衝洗幹淨，幹燥後，在另一瓊脂平板表麵來回移動，蓋上皿蓋。
(2)頭發 在揭開皿蓋的瓊脂平板的上方，用手將頭發用力搖動數次，使細菌降落到玻脂平板表麵，然後蓋上皿蓋。
A. 接種時，用左手將平皿開啟一縫；B.棉簽伸入平板接種;
C.用己滅菌並冷卻了的接種環劃線; D. 第二部分劃線; E.最後部分劃線
(3)咳嗽 將去皿蓋的瓊脂平板放在離口約6～8cm處，對著瓊脂表麵用力咳嗽，然後蓋上皿蓋。
(4)鼻腔
①按照實驗台檢查法的步驟②和③，取出棉簽，並將其弄濕。
②用濕棉簽在鼻腔內滾動數次。
③按實驗台檢查法的步驟⑤和⑥，接種與劃線，然後蓋上皿蓋。
4．將所有的瓊脂平板翻轉，使皿底朝上，放37℃培養箱，培養1～2d。
五．結果記錄方法
(1)菌落計數 在劃線的平板上，如果菌落很多而重疊，則數平板最後1/4麵積內的菌落數。不是劃線的平板，也一分為四，數l/4麵積的菌落數。
(2)根據菌落大小、形狀、高度、幹濕等特征觀察不同的菌落類型。但要注意，如果細菌數量太多，會使很多菌落生長在一起，或者限製了菌落生長而變得很小，因而外觀不典型，故觀察菌落的特點時，要選擇分離得很開的單個菌落。
菌落特征描寫方法如下：
①大小 大、中、小、針尖狀。可先將整個平板上的菌落粗略觀察一下，再決定大、中、小的標準，或由教師指出一個大小範圍。
②顏色 黃色、金黃色、灰色、乳白色、紅色、粉紅色等。
③幹濕情況 幹燥、濕潤、粘稠。
④形態 圓形、不規則等。
⑤高度 扁平、隆起、凹下。
⑥透明程度 透明、半透明、不透明。
⑦邊緣 整齊、不整齊。
五、實驗報告
1．結果
(1)將你自已的平板結果記錄於下表中。
（2）與其他同學所做的結果進行比較
2．思考題
(1)比較各種來源的樣品，哪一種樣品的平板菌落數與菌落類型最多？
(2)人多的實驗室與無菌室(或無人走動的實驗室)相比，平板上的菌落數與菌落類型有什麽區別？你能解釋一下造成這種區別的原因嗎？
(3)洗手前後的手指平板，菌落數有無區別？
(4)通過本次實驗，在防止培養物的汙染與防止細菌的擴散方麵，你學到些什麽？有什麽體會。
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