1、風險管理、風險調查/評估
*實驗環境、器材、方法的要求大幅度提高
*各種SOP越來越細化
藥品微生物的風險管理
中檢院無菌室萬級區域浮遊菌分布圖
近六年無菌室萬級浮遊菌高限圖
潔淨室使用次數與浮遊菌數關係
環境微生物歸屬
2、檢驗理念的轉變
*檢驗方法個性化
*微生物鑒定由形態、生化鑒定向分子生物學鑒定發展
①實驗者由嚴格按照標準檢驗，向按統一原則，選擇適宜的方法轉變
②2015版中國藥典致病菌鑒定策略的轉變
*利用規定的選擇培養基初篩；
*自己選擇確證方法
*建議采用分子遺傳學方法，以最新版的《伯傑氏細菌學鑒定手冊》為金標準（微生物限度檢查法應用指導原則）。
2010版中國藥典沙門菌（Salmonella）的鑒別
1.取培養物1ml，接種於10ml四硫磺酸鈉亮綠培養基中，培養18-24小時後，分別劃線接種與膽鹽硫乳瓊脂（或沙門、誌賀菌屬瓊脂）培養基和麥康凱瓊脂（或曙紅亞甲藍瓊脂）培養基平板上，培養18-24小時，（必要時延長至40-48小時）。若平板上無菌落生長，或生長的菌落不同於表6所列的特征，判供試品未檢出沙門菌。
表6 沙門菌菌落形態特征
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培養基 |
菌落形態 |
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膽鹽硫乳瓊脂 |
無色至淺橙色，半透明，菌落中心帶黑色或全部黑色或無黑色 |
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沙門、誌賀菌屬瓊脂 |
無色至淡紅色，半透明或不透明，菌落中心有時帶黑褐色 |
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曙紅亞甲藍瓊脂 |
無色至淺橙色，透明或半透明，光滑濕潤的圓形菌落 |
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麥康凱瓊脂 |
無色至淺橙色，透明或半透明，菌落中心有時為暗色 |
2.若平板上生長的菌落與表6所列的菌落形態特征相符或疑似，用接種針選2-3個菌落分別用於三糖鐵瓊脂培養基高層斜麵上進行斜麵和高層穿刺接種，培養18-24小時，如斜麵未見紅色，底層未見黃色；或斜麵黃色、底層無黑色，判供試品未檢出沙門菌。
3.否則，應取三糖鐵瓊脂培養基斜麵上的培養物進行適宜的生化試驗和血清凝集試驗，確認是否為沙門菌。
注意：利用多種選擇培養基（特定的營養條件和生態學環境），通過菌落形態、代謝物顯色反應等，采用排除法鑒別。
選擇和分離培養 取預培養物0.1ml接種至10mlRVS增菌肉湯中，30-35℃培養18-24小時，取少量RVS沙門菌增菌肉湯培養物劃線接種於木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂平板上，30-35℃培養18-48小時。
沙門菌在木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽瓊脂平板上生長良好，菌落為紅色，中心有或無黑色。用接種針挑選疑似菌落於三糖鐵瓊脂培養基高層斜麵上進行謝苗和高層穿刺接種，培養18-24小時，或采用其他適宜的方法進一步鑒定。
結果判斷 若木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂平板上有疑似菌落生長，且三糖鐵瓊脂培養基的斜麵為紅色、底層為黃色，或斜麵黃色、底層黑色，應進一步進行適宜的鑒定試驗，確證是否為沙門菌。如果平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長，但鑒定結果為陽性，或三糖鐵瓊脂培養基的斜麵未見紅色、底層未見黃色；或斜麵黃色、底層無黑色，判供試品未檢出沙門菌。
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