前 言
本標準代替GB/T4789.16—2003《食品衛生微生物學檢驗 常見產毒黴菌的鑒定》
本標準與GB/T4789.16—2003相比,主要修改如下:
———標準名稱修改為“食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 常見產毒黴菌的形態學鑒定”;
———增加了檢驗程序;
———增加了黑曲黴、炭黑曲黴、棒曲黴、紅曲黴等產毒菌種;
———修改了標準名稱;
———修改了設備和材料;
———修改了培養基和試劑;
———修改了各菌種形態描述;
———修改了附錄A;
———刪除了黃綠青黴、島青黴、皺褶青黴、產紫青黴、紅青黴等菌種;
———刪除檢索表原附錄B、附錄C、附錄D。
1 範圍
本標準規定了食品中常見產毒真菌的鑒定方法。
本標準適用於曲黴屬(Aspergillus)、青黴屬(Penicillium )、鐮刀菌屬(Fusarium )及其他菌屬中常見產毒真菌的鑒定。
2 設備和材料
除微生物實驗室常規滅菌及培養設備外,其他設備和材料如下:
2.1 冰箱:2℃~5℃。
2.2 恒溫培養箱:25℃±1℃。
2.3 顯微鏡:10倍~100倍。
2.4 目鏡測微尺。
2.5 物鏡測微尺。
2.6 生物安全櫃。
2.7 恒溫水浴箱。
2.8 接種鉤。
2.9 分離針。
2.10 載玻片。
2.11 蓋玻片。
2.12 不鏽鋼小刀或眼科手術小刀。
3 試劑和培養基
3.1 乳酸苯酚液:見A.1。
3.2 查氏培養基:見A.2。
3.3 馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基:見A.3。
3.4 麥芽汁瓊脂培養基:見A.4。
3.5 無糖馬鈴薯瓊脂培養基:見A.5。
4 操作步驟
4.1 菌落特征觀察:為了培養完整的菌落以供觀察記錄,可將純培養物點種於平板上。曲黴、青黴通常接種查氏培養基,鐮刀菌通常需要同時接種多種培養基,其他真菌一般使用馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基。將平板倒轉,向上接種一點或三點,每個菌株接種兩個平板,正置於25 ℃±1 ℃恒溫培養箱中進行培養。當剛長出小菌落時,取出一個平皿以無菌操作,用滅菌不鏽鋼小刀或眼科手術小刀將菌落連同培養基切下1cm×2cm 的小塊,置菌落一側,繼續培養,於5d~14d進行觀察。此法代替小培養法,可觀察子實體著生狀態。
4.2 斜麵觀察:將真菌純培養物劃線接種(曲黴、青黴)或點種(鐮刀菌或其菌)於斜麵,培養5d~14d,觀察菌落形態,同時還可以直接將試管斜麵置低倍顯微鏡下觀察孢子的形態和排列。
4.3 製片:取載玻片加乳酸苯酚液一滴,用接種鉤取一小塊真菌培養物,置乳酸-苯酚液中,用兩支分離針將培養物輕輕撕成小塊,切忌塗抹,以免破壞真菌結構。然後加蓋玻片,如有氣泡,可在酒精燈上加熱排除。製片時應在生物安全櫃或無菌接種罩或接種箱或手套箱內操作以防孢子飛揚。
4.4 鏡檢:觀察真菌菌絲和孢子的形態、特征、孢子的排列等,並記錄。
5 檢驗程序
常見產毒黴菌的形態學鑒定檢驗程序見圖1。
6 各屬真菌的形態特征及可能產生的真菌毒素
6.1 曲黴屬(Aspergillus)
本屬的產毒真菌主要包括黃曲黴、寄生曲黴、雜色曲黴、構巢曲黴、赭曲黴、黑曲黴、炭黑曲黴和棒曲黴等。這些真菌可能產生黃曲黴毒素、赭曲黴毒素、伏馬菌素、展青黴素等次生代謝產物。曲黴屬的菌絲體無色透明或呈明亮的顏色,但不呈暗汙色;可育的分生孢梗莖以大體垂直的方向從特化的厚壁的足細胞生出,光滑或粗糙,通常無橫隔;頂端膨大形成頂囊,具不同形狀,從其表麵形成瓶梗,或先產生梗基,再從梗基上形成瓶梗,最後由瓶梗產生分生孢子。分生孢子單胞,具不同形狀和各種顏色,光滑或具紋飾,連接成不分枝的鏈。由頂囊到分生孢子鏈構成不同形狀的分生孢子頭,顯現不同顏色。有的種可形成厚壁的殼細胞,形狀因種而異;有的種則可形成菌核或類菌核結構;還有的種產生有性階段,形成閉囊殼,內含子囊和子囊孢子,子囊孢子大多透明或具不同顏色、形狀和紋飾。
6.1.1 黃曲黴(A.flavus)
菌落在查氏瓊脂上生長迅速,25℃7d直徑35mm~40mm(~70mm),12d~14d達55mm~70mm;質地主要為致密絲絨狀,有時稍現絮狀或中央部分呈絮狀,平坦或現輻射狀至不規則的溝紋;分生孢子結構多,顏色為黃綠至草綠色,初期較淡,老後稍深,大多近於淺水芹綠色(LightCressGreen→CressGreen,R.XXXI),也有呈木犀綠色(MignonetteGreen,R.XXXI),暗草綠色(Kronberg’sGreen,R.XXXI)或翡翠綠色(JadeGreen,R.XXXI)者,有的菌株初期現黃色,近於鍶黃(Strontium Yellow,R.XVI),而後變綠;一般無滲出液;有的菌株形成少量或大量菌核,大量時,影響菌落外觀,伴隨有滲出液,無色至淡褐色,菌落反麵無色至淡褐色,產生菌核的菌株,在形成菌核處的反麵顯現黑褐色斑點。分生孢子頭初為球形,後呈輻射形,(80~)200~500(~800)μm,或裂成幾個疏鬆的柱狀體,也有少數呈短柱狀者;分生孢子梗大多生自基質,孢梗莖(200~)400~800(~3000)μm×(4~)9.6~16(~20)μm,壁厚,無色,粗糙至很粗糙;頂囊近球形至燒瓶形,直徑(9~)23~50(~65)μm,大部表麵可育,小者僅上部可育;產孢結構雙層:梗基6.2~13.2(19~)×3.2μm×6μm,瓶梗6.2~12μm×2.4~4μm,有的小頂囊隻生瓶梗;分生孢子多為球形或近球形(2.4~)3.6~4.8(~6.4)μm,少數呈橢圓形3.2~5.2μm×2.7~4.2μm,壁稍粗糙至具小刺;有的菌株產生菌核,初為白色,老後呈褐黑色,球形或近球形,大小或數量各異,一般為(280~)420~980μm,見圖2。
黃曲黴的某些菌株可產生黃曲黴毒素(Aflatoxins)。
6.1.2 寄生曲黴(A.parasiticus)
菌落在查氏瓊脂上25℃ 7d直徑35mm,12d~14d50mm~60mm;質地絲絨狀,偶有絮狀菌絲,邊緣白色;分生孢子結構多,顏色為深綠色,近於雪鬆綠(CedarGreen,R.VI),老後變暗近於常春藤綠(IvyGreen,R.XXXI);有輻射狀溝紋,無滲出液,菌落反麵呈淡褐色,近於淺灰褐色(LightDrab,R.VLVI)。分生孢子頭初為球形,後呈輻射形,直徑84μm~210μm;分生孢子梗生自基質,孢梗莖140~420(~800)μm×6~12μm,壁現粗糙,也有近於光滑者;頂囊為杵形或燒瓶形,直徑(13.8~)17~31μm,大部表麵可育;產孢結構單層,瓶梗6.2~10.6μm×2.4~4μm,偶爾可觀察到較長者可達15μm,中間具一隔壁;分生孢子球形或近球形,(3.6~)4.2~5.5(~6.4)μm,壁稍粗糙,具粗硫小刺;未見菌核,見圖3。
寄生曲黴的菌株都能產生黃曲黴毒素。
6.1.3 雜色曲黴(A.versicolor)
菌落在查氏瓊脂上生長局限,25℃7d直徑15mm~17mm,10d~12d達24mm~30mm;質地為絲絨狀或絮狀,或兩種質地並存或相互鑲嵌;菌落不平,稍厚,中央部分隆起或凹陷,或呈不同程度的翹曲;顏色差異很大,初為白色,後呈不同程度的綠色,近於青豆綠、阿福花綠(PoisGreen,AsphodelGreen,R.XLI)至深葡萄綠(DeepGrapeGreen,R.XLI),有的菌株呈孔雀綠(MalachiteGreen,R.XXXⅡ),橄欖綠(OliveGreen,R.Ⅳ)或暗橄欖褐(DarkOliveBuff,R.XL),間或有不呈綠色者,取決於分生孢子結構的多少;菌絲體呈黃褐色、粉紅色,近於淺褐粉紅色(BuffyPink,R.XXLⅢ)或淡粉紅肉桂色(PalePinkishCinnamrn,R.XXIX),因不同菌株而異;分生孢子結構有時形成遲緩;有輻射狀溝紋;滲出液有或無,近於無色或呈淡褐色至紫紅色,形成小滴或聚成大滴;無明顯氣味或稍具黴味;菌落反麵顏色不一,近於無色至淡黃褐色、粉紅色、玫瑰紫色或紫褐色,色素擴散於基質;有的菌株形成殼細胞,老培養物中可見聚成淡黃色的團塊。分生孢子頭較小,初為球形,後呈輻射形,直徑(25~)75~125μm;分生孢梗莖直接生自基質者(45~)150~3(~500μm×4~8μm,生自氣生菌絲者大都很短,無色或稍帶黃色,壁較厚,光滑;頂囊半球形、稍長形或稍呈橢圓形,直徑9~20μm,約3/4的表麵可育,小頂囊僅分生孢梗莖頂部稍加膨大而不明顯;產孢結構雙層:梗基一般5~8μm×2~3μm,瓶梗6~8μm×1.5~2.5μm;分生孢子球形或近球形,綠色,直徑(2~)2.5~3.5(~4)μm,壁粗糙,具小刺;殼細胞球形或近球形,直徑11μm~20μm,大量形成時聚成淡黃色的團塊,見圖4。
雜色曲黴的某些菌株可產生雜色曲黴素(sterigmatocystin)。
6.1.4 構巢裸胞殼(Emericellanidulans)
無性型:構巢曲黴(A .nidulans)
菌落在查氏瓊脂上25℃7d直徑25mm 左右,12d~14d45mm~65mm;質地絲絨狀或絮狀,平坦或具不明顯的放射溝紋;分生孢子結構大量或較少,呈不同程度的綠色,近於翡翠綠至水芹綠(JadeGreen→CressGreen,R.XXXI)或林肯綠至阿福花(LincolnGreen→AsphodelGreen,R.XLI)乃至淺黃橄欖色(LightYellowishOlive,R.XXX);有部分閉囊殼散在其間,有的菌株產生大的閉囊殼,由殼細胞所包圍,使表麵顯現黃色團塊或絮狀顆粒結構,使菌落帶黃褐色,近於鹿褐色、淺黃褐色或古銅色(FawnColor,BuffyBrown,R.XL;IsabellaColor,R.XXX);滲出液多、少或無,呈淡紅褐至紫褐色;無氣味;菌落反麵淡紫褐色至紫褐色,近於葡萄酒鹿褐色(VinaceousFawn,R.XL),稍擴散於基質。閉囊殼球形,暗紫紅色,直徑100~250(~300)μm,外麵由殼細胞所包圍而呈現淡黃色;子囊近球形,8~12μm,一般在二周內成熟,有的則不成熟;子囊孢子雙凸鏡形,3.5~5μm×3.2~4μm,具兩個完整的赤道冠,具褶,寬約0.5~1μm,紫紅色,凸麵光滑。分生孢子頭初為球形至放射形,直徑30~70μm,老後呈致密短形,50~100μm×30~40μm;分生孢子梗生自基質或氣生菌絲,孢梗莖大多較短,(20~)50~150(~300）μm×3.5~6.5μm,稍彎曲,帶茶褐色,壁光滑;頂囊為半球形,顏色與孢梗莖相同,直徑(5.5~)8~16μm,上半部表麵可育;產孢結構雙層:梗基4~8μm×2.5~3μm,有的異常菌株在頂囊上形成肥大的近於球形的梗基,瓶梗5~8μm×2~2.5μm;分生孢子球形(2.5~)3~4(~4.5)μm,粗糙,偶而近於光滑;殼細胞大多為球形,直徑11μm~25μm,少數稍長或橢圓形18~40μm×12~24μm,見圖5。
構巢曲黴的某些菌株可產生雜色曲黴素。
6.1.5 赭曲黴(A.ochraceus)
菌落在查氏瓊脂上25℃7d直徑25mm~35mm ,10d~12d達35mm~55mm;質地絲絨狀或稍現絮狀,平坦或具不明顯的輻射狀溝紋;分生孢子結構稠密或較稀疏,淡黃褐色,近於鹿皮色至肉桂色(Chamois,R.XXX→Cinnamon,R.XXIX)或黃赭色(Yellow Ocher,R.XV),也有近於古銅色(Isabella,R.XXX)者,菌絲體白色;有時形成無色至褐色的滲出液;稍具黴味;有的菌株能形成菌核,單獨或成群;菌落反麵無色或呈不同程度的綠褐色至紫褐色。分生孢子頭初為球形75μm~200μm,老後可達500μm,常裂開成幾個分叉的致密柱狀體;分生孢梗大多生自基質,孢梗莖一般500~1500μm×(6~)10~15μm,少數長者可達200μm 以上,多呈褐色,壁厚0.7~1.5μm,粗糙;頂囊球形或近球形,(20~)30~45(~55)μm,全部表麵可育,偶有小頂囊存在,僅頂部可育;產孢結構雙層:梗基(7~)10~25μm×(2.5~)3~6μm,瓶梗7~13μm×1.5~3μm;分生孢子多為球形或近球形,直徑(2~)2.5~3.5(~4)μm,少數寬橢圓形,3~3.5μm×2.5~3μm,壁近於光滑或細密粗糙。若有菌核則為球形,卵形或稍長,500μm~1000μm,初為白色,後呈紫褐色,見圖6。
赭曲黴的某些菌株可產生赭曲黴毒素(Ochratoxins)。
6.1.6 黑曲黴(A.niger)
菌落在查氏瓊脂上生長迅速,25℃7d直徑一般50mm~70mm,少數菌株較局限;平坦或中心稍凸起,有規則或不規則的輻射狀溝紋;質地絲絨狀或稍呈絮狀,有的菌株偶有不育性過度生長;分生孢子結構大量,表麵呈暗褐黑色至炭黑色;滲出液有或無,無色;具或不具黴味;有的菌株產生菌核,在斜麵培養時多生於基部;菌落反麵無色或呈不同程度的黃色、黃褐色或帶微黃綠色。分生孢子頭初為球形至輻射形,直徑150~500μm,老後分裂成幾個圓柱狀結構,可達800μm;分生孢子梗發生於基質,孢梗莖(800)1500~3500(~4000)μm×9~20μm,壁光滑,老時帶黃色或黃褐色;頂囊球形或近球形,直徑(30~)40~70(~80)μm,老時褐色,全部表麵可育;產孢結構雙層:梗基在一定時間範圍內隨菌齡的增大而增大,(10~)15~35(~70)μm×(3~)5~8(~14)μm,老時暗褐色;瓶梗(7~)8~10(~12)μm×(2~)2.5~3μm,分生孢子球形,近球形或老後橫向變扁,直徑3~4.8(~5.4)μm,壁明顯粗糙或具尖疣、不規則的脊狀突起或縱向條紋,偶有稍現粗糙或近於平滑者;如有菌核則為球形或近球形,直徑700μm~1000μm,或更大,奶油色至淡黃色,見圖7。
黑曲黴的某些菌株可產生B族伏馬菌素(FumonisinsB)。
6.1.7 炭黑曲黴(A.carbonarius)
菌落在查氏瓊脂上生長迅速,25℃7d直徑一般40mm~60mm,平坦;質地絲絨狀,有的菌株有較多的氣生菌絲;分生孢子結構大量,有時在邊緣處或近邊緣處較少,孢子頭純黑色;具少量無色滲出液或無;稍具不明顯的黴味;菌落反麵淡黃色至黃褐色或在中部呈黃褐至黑褐色。分生孢子頭初為球形,直徑100~300(~500)μm,老時分裂成幾個圓柱狀結構,直徑可達1000μm 或更大;分生孢子梗發生於基質,孢梗莖2000~4500×20~30(~40)μm,無色透明,老時近頂囊部分帶黃色或淡褐色,壁平滑;頂囊球形或近球形,直徑70~80(~120)μm,老時帶褐色,全部表麵可育;產孢結構雙層:梗基在一定時間範圍內隨菌齡的增大而增大,通常20~50μm×(5~)7~13μm,大者可長達80μm,老時呈褐色;瓶梗8~12(~15)μm×3~6(~8)μm;分生孢子球形,近球形,直徑6μm~9μm,壁顯著粗糙,老後呈尖疣狀或疣狀,見圖8。文獻報道偶爾產生菌核。
炭黑曲黴的某些菌株可產生伏馬菌素和赭曲黴毒素。
6.1.8 棒曲黴(A.clavatus)
菌落在查氏瓊脂上25℃7d直徑23mm~30mm,12d達30~38(~60)mm;質地絲絨狀至粉粒狀,有環形及輻射形溝紋;菌絲體白色,分生孢子結構暗藍綠色,近於艾綠至百合綠色(ArtemesiaGreen→LilyGreen,R.XLVII),有時分生孢子區中心部分現土黃色;滲出液有或無,無色或淡褐色;無明顯氣味,有的菌株則具強烈的腐臭;菌落反麵無色或淡黃色。分生孢子頭幼時為棒形,長度可達300μm,直徑可達150μm,老後裂成幾個致密的圓柱體;分生孢子梗發生於基質,孢梗莖長短不一,短者300μm~400μm,長者可達3000μm,直徑20~30(~50)μm,壁較薄,光滑無色;頂囊由孢梗莖頂端膨大逐漸成為棍棒形,長度可達250μm,直徑50~60(~100)μm;產孢結構單層:瓶梗密集著生於頂囊的全部表麵,一般為8~12μm×2~3μm,生於頂囊基部者較為短小;分生孢子為橢圓形,3~4.5(~5)μm ×2.5~3μm,壁光滑;未見菌核及有性階段,見圖9。
棒曲黴的某些菌株可產生展青黴素(Patulin)。
6.2 青黴屬(Penicillium)
本屬產毒真菌,主要包括橘青黴、橘灰青黴(異名:圓弧青黴P .cyclopium )、灰黃青黴(異名:展青黴P .patulum ,蕁麻青黴P .urticae)、鮮綠青黴等(原名:純綠青黴P .viridicatum )。這些真菌可能產生桔青黴素、圓弧偶氮酸、展青黴素等次生代謝產物。菌絲細,具橫隔,無色透明或色淡,有顏色者較少,更不會有暗色,展開並產生大量的不規則分枝,形成不同致密程度的菌絲體;由菌絲體組成的菌落邊緣通常明確、整齊,很少有不規則者;分生孢子梗發生於埋伏型菌絲、基質表麵菌絲或氣生菌絲;孢梗莖較細,常具橫隔,某些種在其頂端呈現不同程度的膨大,在頂部或頂端產生帚狀枝,壁平滑或呈現不同程度的粗糙;其中帚狀枝的形狀和複雜程度是鑒別分類的首要標準,帚狀枝有單輪生、雙輪生、三輪生、四輪生和不規則者;產細胞瓶梗相繼產生,彼此緊密、不緊密或近於平行,瓶裝、披針形、圓柱狀和近圓柱狀者少,通常直而不彎,其頂端的梗頸明顯或不明顯;分生孢子是向基的瓶梗孢子,單胞,小,球形、近球形、橢圓形、近橢圓形、卵形或有尖端、圓柱狀和近圓柱狀者少,壁平滑、近於平滑、不同程度的粗糙,形成幹鏈,使菌落表麵形成不同程度顏色,如綠色、藍色、灰色、橄欖色,褐色者少,顏色往往隨著菌齡的增加而變得較深或較暗。
6.2.1 橘青黴(P.citrinum)
菌落在查氏瓊脂上25℃培養12d,直徑20mm~30mm;具少量或大量放射狀皺紋,或有幾道同心環紋;質地通常絨狀或中心帶絮狀;分生孢子結構通常大量產生(偶遇營養缺陷型分離物則生長很稀疏),分生孢子麵通常呈現典型的藍綠色,也有灰綠色者,近於豆綠色、艾綠色至百合綠色(peagreen,Artemisiagreen,Lilygreen,R.PI.XLVII)及淡灰橄欖綠色(lightgrayisholive,R.PI.XLVI);菌絲體白色至黃色;通常有適量或大量的淡黃色、黃色的滲出液;反麵橙黃色、黃褐色或帶紅褐色;可溶性色素淡黃褐色,黃色、偶有缺乏者。
分生孢子梗發生於基質,孢梗莖80~250(~300)μm×2.5~3.2μm,偶有少量發生於氣生菌絲者的長度通常小於80μm,壁平滑;帚狀枝雙輪生,偶有三輪生或單輪生;梗基每輪3~5 個,8.0~16(~20)μm×2.2~3.0μm,同輪中的長短通常相差較大,顯著叉開,頂端通常呈現囊狀膨大;瓶梗每輪6~10個或更多,8.0~9.0(~11)μm×2.0~2.5μm,瓶狀,梗頸短;分生孢子呈現球形或近球形,小,2.5~3.2μm,壁平滑或近於平滑;分生孢子鏈較疏鬆或是較緊密的圓柱狀,見圖10。
橘青黴的某些菌株可產生桔青黴素(Citrinin)。
6.2.2 橘灰青黴P.aurantiogriseum (異名:圓弧青黴P.cyclopium)
菌落在查氏瓊脂上25℃培養12d,直徑42mm~55mm;有少量的放射狀皺紋,同心環紋少或較多,也有近於平坦者;質地絨狀兼粉末狀或顆粒狀;分生孢子結構大量產生,分生孢子麵通常呈現典型的藍綠色,近於豆綠色、艾綠色和百合綠(peagreen,Artimisiagreen,Lilygreen,R.PI.XLVII),中心麵上往往是暗綠色或暗褐綠色,近於暗橄欖綠色(duskyolive-green,R.PI.XLI)或紫杉綠色(Yewgreen,R.PI.XXXI);菌絲體白色;滲出液黃褐色、橘紅色,偶有缺乏者;反麵黃褐色、紅褐色或紫褐色;可溶性色素缺乏,偶有存在。
分生孢子梗發生於基質,孢梗莖(150~)200~400(~500)μm×3.5~4.5μm,壁通常呈現小疣狀粗糙,也有平滑者,這兩者可能出現於同一分離物中;帚狀枝三輪生,雙輪生者少,彼此通常緊貼;副枝1~2(~3)個,12~25(~32)μm×3.2~3.5μm,壁顯著的小疣狀粗糙或平滑;梗基每輪(2~)3~5個,(8.0~)10~15μm×2.8~3.2μm,壁平滑;瓶梗每輪5~7個,8.0~10(~11)μm×2.2~2.6μm,瓶狀,梗頸不明顯;分生孢子呈現球形、近球形至橢圓形,3.5~4.2μm×2.5~3.5μm 或3.2~4.0μm,壁平滑;分生孢子鏈呈現叉開的圓柱狀或疏鬆而不規則,見圖11。
橘灰青黴的代謝產物為圓弧偶氮酸。
6.2.3 灰黃青黴P.griseofulvum(異名:展青黴P.patulum ,蕁麻青黴P.urticae)
菌落在查氏瓊脂上25℃培養12d,直徑20mm~28mm;通常產生大量的放射狀皺紋或中心有臍狀突起而中部麵上有不太明顯的同心環紋;質地通常絨狀,帶輕微絮狀,在邊緣麵上的顆粒狀通常更為突出;分生孢子結構通常大量產生或較少,分生孢子麵灰藍綠色或藍綠色,近於淡灰橄欖色(lightgrayisholive,R.PI.XL.VI)、豆綠色(peagreen,R.PI.XLVII);菌絲體,邊緣通常呈現白色,而中部麵上往往呈現淡黃色至紫褐色;滲出液通常大量產生,帶紅褐色或黃褐色,偶有缺乏者;反麵黃褐色、橘褐色或紅褐色;可溶性色素類似較淡的反麵顏色。
分生孢子梗發生於基質或在孢梗束和束絲之中,孢梗莖250~400(~650)μm×3.2~4.0(~4.5)μm,壁平滑;帚狀枝比較複雜,多是四輪生,三輪生者相對較少,叉開,其分枝點通常2~3個或更多,且顯得分散;副枝通常2~3個,可達4~5個,16~30(~40)μm×3.0~3.5(~4.0)μm;類副枝通常2個,偶有3個,8.0~18μm×3.0~3.5μm;梗基每輪2~4個,8.0~11μm×2.8~3.5μm,頂端通常膨大;瓶梗每輪5~7個,5.0~6.5(~7.5)μm×2.0~2.5μm,瓶狀,短,梗頸也短;分生孢子呈現近球形或寬橢圓形,2.8~3.5μm×2.2~3.0μm,壁光滑,分生孢子鏈呈現較緊密而叉開的圓柱狀或近圓柱狀,見圖12。灰黃青黴的某些菌株產生展青黴素。
6.2.4 鮮綠青黴P.viridicatum(原名:純綠青黴P.viridicatum)
菌落在查氏瓊脂上25℃培養12d,直徑27mm~35mm;有少量放射狀皺紋或幾道同心環紋,偶有近於平坦者;質地絨狀兼顆粒狀;分生孢子結構在菌落邊緣或近邊緣大量產生,分生孢子麵黃綠色,近於林肯綠色、阿月渾子綠色(Lincolngreen,Pistachiogreen,R.PI.XLI)、孔雀石綠色(malachitegreen,R..PL.XXXII);菌絲體白色,中部麵往往呈現微黃白色或淡褐色;滲出液淡黃淺褐色或缺乏;反麵黃色或黃紅褐色;可溶性色素類似較淡的反麵顏色或缺乏。
分生孢子梗發生於基質,孢梗莖150~300(~450)μm×35~4.5μm,壁顯著的疣狀粗糙;帚狀枝三輪生,偶有雙輪生或四輪生,彼此緊貼或較緊貼;副枝1~2個,14~25(~35)μm×3.2~4.0μm;壁顯著疣狀粗糙;梗基每輪2~5個,8.0~14(~16)μm×3.0~3.5μm,壁通常疣狀粗糙,頂端通常膨大;瓶梗每輪5~8個,7.0~11μm×2.2~2.8μm,瓶狀,梗頸短;分生孢子呈現球形或近球形,3.2~4.0(~4.5)μm,壁平滑;分生孢子鏈不規則或近於圓柱狀,見圖13。鮮綠青黴的某些菌株可產生赭曲黴毒素和桔青黴素。
6.3 鐮刀菌屬(Fusarium)
本屬的產毒真菌主要包括禾穀鐮刀菌、串珠鐮刀菌、雪腐鐮刀菌、三線鐮刀菌、梨孢鐮刀菌、擬枝孢鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、茄病鐮刀菌和木賊鐮刀菌等。這些真菌可能產生單端孢黴烯族化合物(Trichothecenes)、玉米赤黴烯酮(Zearalenone,簡稱ZEN)、串珠鐮刀菌素(Moniliformin)和丁烯酸內酯(Butenolide)等次生代謝產物。
在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂或查氏培養基上氣生菌絲發達,高0.5cm~1.0cm 或較低為0.3cm~0.5cm,或更低為0.1cm~0.2cm;氣生菌絲稀疏,有的甚至完全無氣生菌絲而由基質菌絲直接生出粘孢層,內含大量的分生孢子。大多數種小型分生孢子通常假頭狀著生,較少為鏈狀著生,或者假頭狀和鏈狀著生兼有。小型分生孢子生於分枝或不分枝的分生子梗上,形狀多樣,有卵形、梨形、橢圓形、長橢圓形、紡錘形、披針形、臘腸形、柱形、錐形、逗點形、圓形等。1~2(3)隔,通常小型分生孢子的量較大型分生孢子為多。大型分生孢子產生在菌絲的短小爪狀突起上或產生在分生孢子座上,或產生在粘孢團中;大型分生孢子形態多樣,鐮刀形、線形、紡錘形、披針形、柱形、臘腸形、蠕蟲形、鰻魚形,彎曲、直或近於直。頂端細胞形態多樣,有短喙形、錐形、鉤形、線形、柱形,逐漸變窄細或突然收縮。氣生菌絲、子座、粘孢團、菌核可呈各種顏色,基質亦可被染成各種顏色。厚垣孢子間生或頂生,單生或多個成串或成結節狀,有時也生於大型分生孢子的孢室中,無色或具有各種顏色,光滑或粗糙。
鐮刀菌屬的一些種,初次分離時隻產生菌絲體,常常還需誘發產生正常的大型分生孢子以供鑒定。因此須同時接種無糖馬鈴薯瓊脂培養基或查氏培養基等。
6.3.1 串珠鐮刀菌(F.moniliforme)
菌株在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上氣生菌絲棉絮狀,蒼白~粉紅色至淡紫色,米飯培養基上呈玫瑰、紫紅乃至藍色或它們之間的顏色,粘孢團粉紅色、粉紅~肉桂色乃至暗藍色。瓶狀小梗較細長,20~30μm×2~3μm。小型分生孢子鏈狀或假頭狀著生,橢圓形、紡錘形、卵形、梨形、臘腸形,透明,單細胞或有一隔,直或稍彎,3~7(~14)μm×2~3(~4.8)μm。大型分生孢子錐形、鐮刀形、紡錘形、紡錘~鐮刀形、線形,頂端逐漸窄細或粗細均一,或一端較鈍而另一端較銳,透明,壁薄,腳胞明顯或楔形,3~6(~7)隔,見圖14。3~4隔:(25μm~36μm)×(2.5μm~3.5μm);5~6隔:(30μm~50μm)×(2.5μm~4μm);7隔:40~60(~14)μm×3~4.8μm。
無厚垣孢子,有子座及菌核,呈黃、褐或紫色。
子囊階段:藤倉赤黴(Gibberellafujikuroi)。
子囊殼深藍色,球形、卵形或圓錐形,外壁具疣狀突起,(250μm~330μm)×(220μm~280μm),子囊圓筒形~臘腸形,含4~8個子囊孢子,子囊孢子橢圓形,1隔,(14μm~18μm)×(4.4μm~7μm)。
串珠鐮刀菌主要分布在水稻上,還可在玉蜀黍、甘蔗及橘柑、棉、洋蔥等植物的根、莖、穗、種子及土壤中,能產生串珠鐮刀菌素和玉米赤黴烯酮等。
6.3.2 禾穀鐮刀菌(F.graminearum)
禾穀鐮刀菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上生長快,4d後菌落平均直徑8.9cm,生長旺盛,菌絲棉絮狀至絲狀,白色、淡玫瑰色、白~洋紅色,中央有時有黃色氣生菌絲區。反麵深洋紅色或淡磚紅-赭色。通常野生菌株不產孢子,在加3%食鹽的查氏培養液或麥粒煎汁培養基深層震蕩培養4d~5d時可產生大型分生孢子。大型分生孢子近鐮刀形、紡錘形、披針形,橢圓形彎曲或近於直,頂端逐漸變細,頂端細胞較細長,腳胞通常明顯或楔狀,大多數3~5隔,極少數1~2隔或6~9隔,無色,聚集時淺紅色,單個孢子無色,聚集時呈淺粉紅色,見圖15。
大型分生孢子量度3~4隔25~40μm×2.5~4μm
5~7隔48~50×3~3.5μm(變幅35~62×2.5~5μm)
在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上通常無厚垣孢子,但在菌絲中可見膨大細胞。膨大細胞球形或卵形,單個或成串頂生或間生,壁薄,透明,直徑6~12(~14)μm。
有些菌株在馬鈴薯塊或米飯上產生菌核和子座。本種無小型分生孢子,一般不產厚垣孢子,如有也極少,間生。子囊殼散生或聚集,在受害植物組織上產生。
子囊階段:玉米赤黴(Gibberellazeae)。
禾穀鐮刀菌是赤黴病麥的主要病原菌,主要引起小麥、大麥和元麥的赤黴病,禾穀鐮刀菌還可以感染玉米和水稻等,能產生脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(Deoxynivalenol,簡稱DON))、玉米赤黴烯酮(ZEN)和T-2毒素(T-2toxin)等。
6.3.3 梨孢鐮刀菌(F.poae)
梨孢鐮刀菌在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上生長快,呈洋紅色、蒼白~玫瑰色、玫瑰~洋紅色洋紅~赭色,反麵呈深淺不同的洋紅色或淺紫洋紅色,蛛絲狀、絲狀,有時帶粉狀。小型分生孢子生於桶狀的瓶狀小梗上,假頭著生,瓶狀小梗15~2μm×2.5μm。小型分生孢子主要呈球形和梨形,其次為檸檬形、倒卵形、橢圓形、窄瓜子形,0~1隔,透明,球形孢子直徑4~8(10)μm,其他形狀的小型分生孢子8~20(26)μm×2.5~8(9)μm。
大型分生孢子近鐮刀形、紡錘~披針形,彎度稍大,上半部稍寬,頂端細胞短鈍,腳胞有或無,培養時常見1~3隔孢子,3隔:17~44μm×3~5μm。厚垣孢子生於菌絲中,矩圓形至橢圓或似橢圓形,多數間生,少數頂生、單生或數個成串,或結節狀,赭黃色,見圖16。
梨孢鐮刀菌主要寄生於穀類,可產生T-2毒素、HT-2毒素、新茄病鐮刀菌烯醇和丁烯酸內酯等。
6.3.4 三線鐮刀菌(F.tricinctum)
三線鐮刀菌與梨孢鐮刀菌非常近似,隻是在下述幾點上有區別:
a) 小型分生孢子以卵形、窄瓜子形、梨形的孢子居多,球形較少;
b) 瓶狀小梗船形至筒形居多,桶形較少;
c) 大型分生孢子易見3隔以上的孢子,見圖17。
3隔:26~38μm×3~4.7μm;
5隔:34~53μm×3~4.8μm。
厚垣孢子呈球形,壁光滑,間生、單生或成串。
本菌主要寄生於玉米和小麥的種子上,可產生T-2毒素、丁烯酸內酯、二乙酸藨草鐮刀菌烯醇(Diacetoxyscirpenol,簡稱DAS)和玉米赤黴烯酮。
6.3.5 雪腐鐮刀菌(F.nivale)
雪腐鐮刀菌在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上菌落白色、淺桃色、粉紅色至杏黃色,培養基(基質)稍呈淺黃色,菌絲呈稀疏棉絮狀、蛛絲狀,生長速度為4d後平均菌落直徑超過1cm。在4℃發育良好,培養7d~10d可見分生孢子,分生孢子直接產生於氣生菌絲中,但在某些菌株中,分生孢子可自小的分生孢子梗座上生出,粘孢團呈鮭橙色、淺橙色,幹時肉桂褐色,菌絲直徑1.5~5μm,瓶狀小梗7~9μm×2.5~3μm,分生孢子紡錘~鐮刀形至香腸形,彎曲,兩端漸變窄,末端鈍圓,無腳胞,有時基部稍呈楔形,(0)1~3(5)隔,(5)7~30(35)μm×(2)2.5~4.0(5.0)μm,。厚垣孢子缺,子座小,透明,粉紅至磚紅,後期革褐色。
子囊殼埋生於罹病植株近莖基部葉的表皮下,外表呈小黑點狀,無子座,切片觀察,子囊殼呈卵形至球形,頂端乳頭狀,透明,貫穿表皮但不隆起,120~180μm,×100~150μm。子囊殼壁厚14~20μm,由兩層組成,外壁由4~5層長形至球形細胞組成,5~7μm,×2.5~3μm,具淺色素。內壁由數層薄壁細胞所組成。子囊棍棒形,偶爾圓柱形,薄壁60~70μm×6~7μm,含6~8個子囊孢子,子囊孢子橢圓形,中央有一個隔膜,但後期在兩側可再各生一個隔膜,10~17μm×3.5~4.5μm,見圖18。
本菌無厚垣孢子,子座小,透明,呈粉紅至磚紅色,後期變為革褐色。
子囊階段:雪腐小赤殼(MicronectriellaMivalis)。
雪腐鐮刀菌主要分布在水稻上,還可在玉蜀黍、甘蔗及橘柑、棉、洋蔥等植物的根、莖、穗、種子及土壤中,滅菌秸稈上低於18℃培養10d~15d,子囊殼生長茂盛,可產生鐮刀菌烯酮-X、雪腐鐮刀菌烯醇和二乙酸雪腐鐮刀菌烯醇等有毒代謝產物。
6.3.6 擬枝孢鐮刀菌(F.sporotricoides)
擬枝孢鐮刀菌在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上生長速度較快(4d後菌落平均直徑3.5cm),氣生菌絲蛛絲狀,下部櫻桃紅鉛紅,表麵白色至淺玫瑰色,菌落反麵鉛紅色,瓊脂本身無色。小型分生孢子生於氣生菌絲的多芽產孢及簡單的瓶狀小梗上,簡單瓶形小梗筒形,12~17μm×2.5~3μm,見圖19。小型分生孢子橢圓形、紡錘形或倒卵形,0~1隔,7~10μm×3~5μm。大型分生孢子生於茂盛分枝的分生孢子梗上或分生孢子梗座上,瓶狀小梗12~25μm×2.5~3μm。大型分生孢子鐮刀形、紡錘~鐮刀形、披針形,彎曲,無腳胞或楔形,3~5隔,24~48μm×3.5~5μm。厚垣孢子間生於菌絲中,單生或成串,球形,壁光滑,透明,成熟時變為淡褐色,直徑10~15μm。本菌主要寄生於禾穀類、蔬菜及雜草的種子及土壤中,能產生T-2毒素、HT-2毒素、丁烯酸內酯和新茄病鐮刀菌烯醇。
6.3.7 木賊鐮刀菌(F.equiseti)
本菌生長速度快(4d後菌落直徑平均5.8cm),在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上氣生菌絲棉絮狀,白色、乳黃至褐色,米飯培養基上肉桂色。缺乏真正的小型分子孢子,大型分生孢子產生在近似帚狀分枝的分生孢梗上或產生在氣生菌絲單生的側生瓶裝小梗上,(10)12~17μm×(2.5)3~4μm。大型分生孢子紡錘-~鐮刀形、弧弓形、披針形,鰻狀彎曲、拋物線彎曲、雙曲線彎曲或近於直,中央細胞明顯膨大,頂端細胞常窄細成長刺或線狀,腳細胞明顯,3~7隔,見圖20。
3隔: 22~45μm×3.5~5μm;
5隔: 40~58μm×3.7~5μm;
7隔: 42~60μm×4~5.9μm。
厚垣孢子間生於菌絲中,單獨、成鏈或結節狀,有極粗的疣狀突起或光滑,黃褐色或透明,單個厚垣孢子直徑6~10μm。
子囊階段:錯綜赤黴(Gibberellaintricans)。
子囊殼單生或聚集,卵形,外壁疣瘤狀,200~350μm×180~240μm,子囊棍棒形,含4~8個單行或雙斜行排列的子囊孢子,子囊孢子3隔,少數1~2隔,透明,紡錘形,21~33μm×4~4.5μm。
本菌廣泛分布於許多植物(禾穀類、豆類、藥用植物、油料植物等)的根、莖基、果實、種子和土壤中,可造成植物枯萎病及根腐,能產生二醋酸藨草鐮刀菌烯醇(DAS)、玉米赤黴烯酮、新茄病鐮刀菌烯醇和丁烯酸內酯。
6.3.8 茄病鐮刀菌(F.solani)
本菌在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上生長速度快(3.2cm),氣生菌絲生長良好,棉絮狀或茸毛狀,灰白色至蒼白淺黃色,瓊脂常有藍色至藍褐色或淺褐葡酒色或淺褐暗藍色。粘孢團有或無,如有則呈白、褐、黃、綠、藍或它們之間的顏色。小型分生孢子假頭狀著生,瓶裝小梗筒形,40~80×2.5~3μm。小型分生孢子橢圓形,卵圓形,長橢圓形,0~1隔,光滑,4~15×3~5μm (變化幅3~19×2~6μm)。大型分生孢子紡錘~鐮刀形,紡錘~柱形或近鐮刀形,稍彎或直,很大距離的長度上直徑相等,上部第2~3個細胞最亮,頂端細胞短,稍窄細或變鈍,腳胞明顯或無,壁相當厚,2~5(~8)隔。3隔:17~44μm(~52)×4~5(~7)μm;4~5隔:35~55μm(~60)×4.5~6.5(~7)μm;6~7隔:45~65μm(~70)×5~6.5(~7.2)μm。
厚垣孢子頂生或間生,單生或雙細胞,光滑或具小疣狀突起,單細胞的厚垣孢子圓形或短圓形,直徑約7~14(~16)μm。米飯及馬鈴薯塊上子座微白~黃色、微白~赭色、奶油黃色,暗藍色、淺紫肉桂色、赭~肉桂色,菌核有或無。子囊殼在寄主植物上稀疏至密聚,通常著生在假薄壁組織的子座墊上,不規則球形,具疣狀突起,淺橙色至棕色或最後淺褐色,直徑130~200μm(110~250μm),子囊筒形~棍棒性,頂端鈍圓,具一孔口,60~80μm×8~12μm,含8隔子囊孢子,子囊孢子橢圓形至倒卵形,中央有一隔,隔膜處稍溢縮,透明,後變淺褐色,壁具縱紋,11~18μm×4~7μm(平均12.5×5.5μm),見圖21。
子囊階段:紅球叢赤殼(Nectriahaematocococa)。
茄病鐮刀菌可自許多罹病植物的根莖、果實及種子分離到,能產生新茄病鐮刀菌烯醇和玉米赤黴烯酮。
說明:
6.3.9 尖孢鐮刀菌(F.oxysporum)
菌株在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上蒼白、鮭色、粉紅色、淡葡酒色、紫色、蒼白~板石色,菌絲細毛狀、茸毛狀至棉毛狀,有時幾乎不發達,僅有貼伏狀菌絲繩狀細絲蔓延。菌落粘質,子座白色、粉紅色、橙色、紫紅色。小型分生孢子假頭狀著生,0~1隔,卵形至臘腸形,生於側生的瓶狀小梗上。大型分生孢子鐮刀形、線形、矛形紡錘~錐形至紡錘~鐮刀形,較窄、壁薄,末端直、稍彎或成喙狀,腳胞有或呈楔狀,厚垣孢子通常多,頂生或間生,單生或成鏈。子座突起經常形成有類似赤黴屬(Gibberella)的子囊殼,但未報告有子囊或子囊孢子,通常認為本組的子囊階段未明。
小型分生孢子:6~14μm×2~3(4~18×1.8~3.5)μm;
大型分生孢子:3隔 23~45μm×2.5~3.5(16~50×2~4.5)μm;
5隔 30~40μm×3~4(22~50×2.2~4.8)μm;
6~7隔 50~55μm×3~4(45~60×2.2~4.8)μm。
菌絲中的厚垣孢子頂生或間生,單細胞或雙細胞,光滑或粗糙或有疣狀突起,單細胞的厚垣孢子圓形或矩圓形,直徑約5μm~13μm(~16)μm ,見圖22。
尖孢鐮刀菌可寄生於玉米、小麥和大麥的種子上,可產生玉米赤黴烯酮和T-2毒素。
6.4 木黴屬(Trichoderma)
木黴生長迅速,菌落棉絮狀或致密叢束狀,產孢叢束區常排列成同心輪紋,菌落表麵顏色為不同程度的綠色,有些菌株由於產孢不良幾乎呈白色。菌落反麵無色或有色,氣味有或無,菌絲透明,有隔,分枝繁複。厚垣孢子有或無,間生於菌絲中或頂生於菌絲短側分枝上,球形、橢圓形、無色,壁光滑。分生孢子梗為菌絲的短側枝,其上對生或互生分枝,分枝上又可繼續分枝,形成二級、三級分枝,終而形成似鬆柏式的分枝輪廓,分枝角度為銳角或幾乎直角,束生、對生、互生或單生瓶狀小梗。分枝的末端即為小梗,但有的菌株主梗的末端為一鞭狀而彎曲不孕菌絲。分生孢子由小梗相繼生出靠粘液將其聚成球形或近球形的孢子頭,有時幾個孢子頭匯成一個大的孢子頭。分生孢子近球形或橢圓形、圓筒形、倒卵形等,壁光滑或粗糙,透明或亮黃綠色,見圖23。
木黴屬中裏氏木黴(T .reesei)和綠色木黴(T .viride)的一些菌株產生木黴素,屬於單端孢黴烯族化合物。
6.5 頭孢黴屬(Cephalosporium)
在合成培養基及馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上各個種的菌落類型不一,有些種缺乏氣生菌絲,濕潤或呈細菌狀菌落,有些種氣生菌絲發達,呈茸毛狀或絮狀菌落,或有明顯的繩狀菌絲索或孢梗束。菌落的色澤可由粉紅至深紅,白、灰色或黃色。營養菌絲有隔,分枝,無色或鮮色或者在少數情況下由於盛產厚垣孢子而呈暗色。菌絲常繞結成繩狀或孢梗束。分生孢子梗很短,大多數從氣生菌絲上生出,基部稍膨大,呈瓶狀結構,互生、對生或輪生。分生孢子從瓶狀小梗頂端溢出後推至側旁,靠粘液把它們粘成假頭狀,遇水即散開,成熟的孢子近圓形、卵形、橢圓形或圓柱形,單細胞或偶爾有一隔,透明,見圖24。有些種具有性階段可形成子囊殼。
頭孢黴屬的某些菌株能引起芹菜、大豆和甘蔗等的植物病害,它所產生的毒素屬於單端孢黴烯族化合物。
6.6 單端孢黴屬(Trichothecium)
本屬菌落薄,絮狀蔓延,分生孢子梗直立,有隔,不分枝。分生孢子2室~4室,透明或淡粉紅色。
分生孢子是以向基式連續形成的形式產生,孢子靠著生痕彼此連接成串,分生孢子梨形或倒卵形,兩胞室的孢子上胞室較大,下胞室基端明顯收縮變細,著生痕在基端或其一側,見圖25。
該屬的某些菌株能產生單端孢黴素,屬於單端孢黴烯族化合物。
6.7 葡萄穗黴屬(Stachybotrys)
葡萄穗黴菌絲匍匐、蔓延,有隔,分枝,透明或稍有色。分生孢子梗從菌絲直立生出,最初透明然後煙褐色,規則地互生分枝或不規則分枝,每個分枝的末端生瓶狀小梗,透明或淺褐色,在分枝末端單生、兩個對生至數個輪生。分生孢子單個地生在瓶狀小梗的末端,橢圓形、近柱形或卵形,暗褐色,有刺狀突起,見圖26。
該屬的某些菌株產生黑葡萄穗黴毒素,屬於單端孢黴烯族化合物。
6.8 交鏈孢黴屬(Alternaria)
交鏈孢黴的不育菌絲匍匐,分隔。分生孢子梗,通常比菌絲粗而色深,直立單生或成簇,大多不分枝,較短。分生孢子倒棍形、卵形、倒梨形、橢圓形或近圓柱形,基部鈍圓,頂端延長成喙狀,淡褐色,有壁磚狀分隔,暗褐色,成鏈生長,孢子形態及大小極不規律,見圖27。
該屬的某些菌株能產生交鏈孢酚(Alternariol,簡稱AOH)、交鏈孢酚單甲醚(alternariolmethylether,AME)和細交鏈孢菌酮酸(tenuazonicacid,TeA)等多種真菌毒素。
6.9 節菱孢屬(Arthrinium)
在馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基上,菌落生長蔓延,5d~6d直徑達9cm,白色或略帶黃色絮狀,背麵(基質菌絲)微黃至深褐。有的菌落中間呈褐色,背麵黑褐色,有的菌落帶粉紅色,有的菌絲較稀疏,並具有大量黑色孢子團。分生孢子梗從母細胞垂直於菌絲而生出,分生孢子頂生或側生。孢子褐色,光滑,雙凸鏡形、正麵直徑6.8μm~13.3μm,側麵厚度4.0μm~10.0μm,有的菌株具有臘腸形孢子,褐色、光滑、大小為(10.6μm~14.7μm)×(4.0μm~5.3μm),見圖28。
該屬的甘蔗節菱孢(A .saccharicola)和蔗生節菱孢(A .phaeospermum )中的一些菌株能產生3-硝基丙酸。
6.10 紅曲菌屬(Monascus)
紅曲菌在麥芽汁瓊脂培養基上生長良好,菌落初為白色,老熟後變為淡粉色、紫紅色或灰黑色,因種而異。通常這類菌都能形成紅色色素,甚至分泌到培養基中。菌絲具橫隔,多核,分枝甚繁,且不規律。
細胞幼時含顆粒,老後含空泡及油滴,菌絲體不產生與營養菌絲有區別的分生孢子梗。分生孢子著生在菌絲及其分枝的頂端,單生或以向基式生出,2個~6個成鏈。閉囊殼球形,有柄,柄長短不一。閉囊殼內散生十多個子囊,子囊球形,含8個子囊孢子,成熟後子囊壁解體,孢子剩留在薄壁的閉囊殼內,見圖29。
紅曲菌的某些菌株可產生桔青黴素。
7 結果與報告
根據菌落形態及鏡檢結果,參照上述各種真菌的形態描述,確定菌種名稱,報告真菌菌種鑒定結果。
8 其他
該標準中涉及的實驗操作應在生物安全二級實驗室內進行。
附 錄 A
培養基和試劑
A.1 乳酸苯酚液
A.1.1 成分
苯酚(純結晶) 10g
乳酸10g
甘油20g
蒸餾水10mL
A.1.2 製法
將苯酚置水浴中至結晶液化後加入乳酸、甘油和蒸餾水。
A.2 查氏培養基
A.2.1 成分
NaNO3 3.0g
K2HPO4 1.0g
KCL 0.5g
MgSO4·7H2O 0.5g
FeSO4·7H2O 0.01g
蔗糖30g
瓊脂15g
蒸餾水1000mL
A.2.2 製法
量取600mL蒸餾水分別加入蔗糖、NaNO3、K2HPO4、KCl、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O,依次逐一加入水中溶解後加入瓊脂,加熱融化,補加蒸餾水至1000mL,分裝後,121℃滅菌15min。
A.3 馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養基
A.3.1 成分
馬鈴薯(去皮切塊) 200g
葡萄糖20.0g
瓊脂20.0g
蒸餾水1000mL
A.3.2 製法
將馬鈴薯去皮切塊,加1000 mL 蒸餾水,煮沸10 min~20 min。用紗布過濾,補加蒸餾水至1000mL。加入葡萄糖和瓊脂,加熱溶化,分裝後,121℃滅菌20min。
A.4 麥芽汁瓊脂培養基
A.4.1 成分
麥芽汁提取物20g
蛋白腖1g
葡萄糖20g
瓊脂15g
A.4.2 製法
稱取蛋白腖、葡萄糖、瓊脂,加入麥芽汁提取物,適量蒸餾水,加熱溶化,補足至1000mL,分裝後,121℃滅菌20min。
A.5 無糖馬鈴薯瓊脂培養基
A.5.1 成分
馬鈴薯(去皮切塊) 200g
瓊脂20.0g
蒸餾水1000mL
A.5.2 製法
將馬鈴薯去皮切塊,加1000 mL 蒸餾水,煮沸10 min~20 min。用紗布過濾,補加蒸餾水至1000mL,加入瓊脂,加熱溶化,分裝後,121℃滅菌20min。
