一、試驗原理
石蕊是一種pH指示劑，在酸性溶液（pH≤4.5）呈紅色，在堿性（pH＞8.3）呈藍色，培養基本色應為紫藍色（4.5＜pH≤8.3）。同時石蕊也具有可還原的性質，某些細菌能夠把石蕊還原成無色。
牛奶中含有酪蛋白、乳蛋白、乳球蛋白和乳糖，某些含有凝乳酶的細菌可以使牛奶凝固，這些細菌通過使酪蛋白轉化成副酪蛋白，或者發酵乳糖產生大量酸使酪蛋白沉澱使牛奶凝固。
還有些細菌產生脂酶，分解牛奶中的脂肪，形成黃色透明液體。
另外，部分細菌具有酪蛋白水解酶，可催化酪蛋白水解，最終轉化成透明液體的酪蛋白原沉澱物，整個過程稱為蛋白腖化。
二、培養基
|
脫脂奶粉 |
100.0g |
|
石蕊 |
適量 |
|
水 |
1000.0ml |
將奶粉充分溶化於水中,調至pH6.8，加入石蕊溶液直到呈現紫藍色（pH6.8),分裝試管，每管約5ml。於115℃滅菌10min，迅速冷卻，放冰箱中備用。
石蕊溶液配製法：
稱取石蕊2.5g，放入缽中研碎，移放於盛有40%乙醇水溶液50ml的燒瓶中，煮沸1min，靜置約10min，吸取上清液移入另一燒瓶中，再加40%乙醇水溶液50 ml於原燒瓶中，再煮沸1min。將上清液加於前上清液中，將兩次上清液混合均勻，離心沉澱，將上清液倒入100ml量筒中，用40%乙醇補至100ml，滴加1ml鹽酸直至溶液呈現紫色，即為2.5%石蕊溶液。95%乙醇42.1ml加水至100ml即為40%乙醇溶液。
三、試驗方法
以待試菌18-24h培養物接種，若為厭氧芽孢杆菌，應在培養基管中加入無菌鐵屑或鐵釘等，並加無菌凡士林等覆蓋，置36±1℃培養1-14天。
四、試驗結果判斷：
1. 粉紅色：乳糖被發酵產酸；
2. 紫藍色：乳糖為被發酵，保持原色；
3. 藍色：堿性反應，乳糖為被發酵，細菌分解培養基中含氮物質，產生堿性物質；
4. 白色：石蕊被還原；
5. 澄清：牛奶蛋白被消化（腖化）；
6. 凝塊會成凝乳：因大量產酸，牛奶蛋被被凝固；
7. 產氣：乳糖被分解產酸產氣，強烈發酵可破壞凝塊。
五、注意事項
如無脫脂奶粉，可將新鮮牛奶放冰箱過夜，除淨上麵的奶油層，將脫脂奶置於流動蒸汽加熱滅菌1h，冷卻到小於10℃，以滅菌紗布過濾，加石蕊溶液至淡紫色為止，分裝試管，滅菌同前。
細菌對牛奶的作用如下表：
|
培養基顏色變化 |
培養基狀態變化 |
細菌產物 |
|
變紅 |
無變化 |
發酵乳糖產酸 |
|
變藍 |
無變化 |
分解酪蛋白產堿 |
|
無變化 |
澄清 |
產蛋白酶分解酪蛋白 |
|
變紅 |
凝固 |
發酵乳糖產大量酸 |
|
藍色或不變色 |
凝固 |
產凝乳酶凝固酪蛋白 |
|
石蕊還原褪色 |
無變化 |
細菌生長旺盛電位降低 |
注：本文屬betway必威西汉姆联生物原創，未經允許不得轉載。
下一篇：細菌生化試驗—賴氨酸鐵瓊脂試驗
