（1）在肉膏蛋白腖斜麵試管上，用記號筆寫上將接種的菌名、日期和接種者。
（2）點燃酒精燈或煤氣燈。
（3）將菌種試管和待接種的斜麵試管，用大拇指和食指、中指、無名指握在左手中，並將中指夾在兩試管之間，使斜麵向上，成水平狀態，。在火焰邊用右手鬆動試管塞，以利於接種時拔出。
（4）右手拿接種環通過火焰燒灼滅菌（參照實驗一），在火焰邊用右手的手掌邊緣和小指，小指和無名指分別夾持棉塞（或試管帽），將其取出，並迅速燒灼管口。
（5）將滅菌的接種環伸入菌種試管內，先將環接觸試管內壁或未長菌的培養基，達到冷卻的目的，然後再挑取少許菌苔。將接種環退出菌種試管，迅速伸入待接種的斜麵試管，用環在斜麵上自試管底部向上端輕輕地劃直線，勿將培養基劃破，也不要使環接觸管壁或管口。
（6）接種環退出斜麵試管，再用火焰燒管口，並在火焰邊將試管塞塞上。將接種環逐漸接近火焰，再燒灼。如果接種環上沾的菌體較多時，應先將環在火焰邊烤幹，然後燒灼，以免未燒死的菌種飛濺出汙染環境，接種病原菌時更要注意此點。
二、液體培養基接種
向肉膏蛋白腖液體培養基中接種少量菌體時，其操作步驟基本與斜麵接種時相同，不同之處是挑取菌體的接種環放入液體培養基後，應在液體表麵處的管內壁上輕輕磨擦，使菌體從環上脫落，混進液體培養基，塞好試管塞後，搖動液體，使菌體在液體中分布均勻，或用試管振蕩器混勻。
向液體培養基中接種量大或要求定量接種時，可將無菌水或液體培養基注入菌種試管，用接種環將菌苔刮下，再將菌種懸液以無菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液體培養基。如果菌種為液體培養物，則可用無菌吸管定量吸出加入或直接倒入液體培養基。整個接種過程都要求無菌操作。三、穿刺接種
用接種針挑取菌種（針必須挺直），自培養基的中心垂直地刺入半固體培養基中，直至接近管底，但不要穿透，然後沿原穿刺線將針拔出，塞上試管塞，燒灼接種針。
上述幾種接種法的無菌操作，凡未敘述的均按實驗一操作。試驗者應反複練習無菌操作接種技術，直至較熟練地掌握。
四、將已接種的斜麵、液體和半固體培養基放置28—30℃溫箱，培養2—3天後取出觀察結果。
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