自然界中的很多微生物都具有產酶的特性,其中最常見的四種分別是過氧化氫酶、氧化酶、凝固酶和DNA酶。下麵就這四種酶的檢驗方法做一下介紹。
1、過氧化氫酶實驗
很多細菌都可以產過氧化氫酶,過氧化氫酶能夠催化過氧化氫,釋放出氧氣,從而產生氣泡。檢驗方法是取3%過氧化氫溶液0.5ML,滴加於不含血液的細菌瓊脂培養基上,或者取1-3ML滴加到10ML的菌懸液中。如果培養物中出現氣泡則為陽性。做過氧化氫酶實驗時要注意以下幾點:1、細菌要新鮮。2因為紅細胞中含有過氧化氫酶,可能出現假陽性,所以不能用血瓊脂平板做過氧化氫酶實驗。
2、氧化酶實驗
具有氧化酶的細菌,能夠氧化對苯二胺,生成有色的醌類化合物。檢驗方法是取潔淨的濾紙一小塊,塗抹菌苔少許,滴加一滴10g/L對苯二胺溶液於菌落上,觀察顏色變化。如果立即呈粉紅色並迅速轉為紫紅色者為陽性。做該類實驗應注意不能采用在含葡萄糖培養基上生長的菌落,因為葡萄糖發酵可抑製氧化酶的活性。
3、凝固酶實驗
金黃色葡萄球菌可產生遊離的凝固酶,從而使血漿凝固。檢驗方法是取兩支試管,分別加入0.5ML血漿(可適當稀釋),挑取菌落加入到試管中,用已知的陽性菌株作為對照,37攝氏度下水浴3-4小時。血漿凝固者為陽性。
4、DNA酶實驗
某些細菌可產胞外DNA酶,DNA酶可以水解DNA長鏈,形成的寡核苷酸可溶於酸,當在菌落平板上加入酸後,若在菌落周圍出現透明環,則表明該菌具有DNA酶。檢測方法是將待檢菌落點狀接種於DNA瓊脂平板上,35攝氏度培養18-24小時,在細菌生長物上加一層1MOL/L鹽酸(使菌落浸沒),如果菌落周圍出現透明環則為陽性,無透明環為陰性。需注意的是革蘭氏陽性菌中隻有金黃色葡萄球菌可產生DNA酶,因此此方法可用來鑒定金黃色葡萄球菌。
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