MH瓊脂的原理和使用方法

一、試驗原理：

本培養基主要用於用於瓊脂紙片擴散法（kirby-baner紙片擴散法）測定細菌對抗生素敏感性。 牛肉粉和酸水解酪蛋白提供氮源、維生素和氨基酸；可溶性澱粉吸收有毒的代謝產物；瓊脂是培養基的凝固劑。

二、培養基配方（g/L）：

三、試驗方法：

1.平板的製備與保存

稱取Mueller-Hinton瓊脂42.0g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝三角瓶，121℃高壓滅菌15min，傾注培養基到無菌平皿中，使之在平皿中形成一個厚度為4-5 mm的瓊脂層。傾注後將平板放到水平平麵，使瓊脂冷卻凝固。凝固後的培養基應立即使用或存放於暗處和（或）5 ℃±3 ℃冰箱的密封袋中，在有效期內使用。使用前應可將平板置35 ℃溫箱中或置室溫層流櫥中對瓊脂表麵進行幹燥，培養基表麵應濕潤，但不能有水滴，培養皿也不應有水滴。 

2. 質控菌株的複蘇 

將質控菌株接種到TSA平板上，按標準方法中規定的培養時間和溫度進行培養。檢查純度合格後，用於質控工作菌懸液的製備。 

3. 質控菌工作菌懸液的製備

將純度滿意的質控菌株培養物懸浮於TSB肉湯中，並調整濁度為0.5麥氏標準（約1×10⁸ CFU/mL～2×10⁸ CFU/mL）。 

4. 接種 

用塗布法將質控工作菌懸液接種於MH平板上，並貼上相應的抗生素紙片（每平板最多貼6片），將平板翻轉後按標準方法中規定的培養時間和溫度進行培養。調整菌懸液濁度與接種所有平板間的時間間隔不要超過15 min。 

四、結果觀察與解釋 

接種以下質控菌株，放置36±1℃需氧培養18-24小時。在無反射黑色背景下，觀察有無抑菌環。

MH瓊脂質控參考標準

抗生素名稱	紙片抗生素 (mg)	抑菌圈（mm）
		大腸埃希菌 ATCC 25922	銅綠假單胞菌 ATCC 27853	金黃色葡萄球菌 ATCC 25923	糞腸球菌 ATCC 29212
慶大黴素	10	19-26	16-21	19-27
羥苄青黴素	100	23-29	18-24	-
四環素	30	18-25	-	24-30
多黏菌素B	300IU	12-16	11-16	-
氯黴素	30	21-27	-	19-26
TMP-SMZ	1.25/23.75	24-32	-	24-32	≥20
頭孢呱酮	75	28-34	23-29	24-33

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