克氏雙糖鐵瓊脂的原理及使用方法

一、用途和原理：

 克氏雙糖鐵瓊脂(Kligler Iron Agar)用於鑒別腸道菌發酵葡萄糖和乳糖，及產生硫化氫的生化反應。

蛋白腖、牛肉膏粉和酵母膏粉提供氮源、維生素、礦物質;乳糖、葡萄糖為可發酵糖類，其產酸時通過酚紅指示劑測出，酸性呈黃色，堿性呈紅色；硫代硫酸鈉可被某些細菌還原為硫化氫，與鐵鹽生成黑色硫化鐵;氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養基的凝固劑。

二、使用方法：

 1、稱取克氏雙糖鐵瓊脂55g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至完全溶解，分裝試管(裝量宜多些)，121℃高壓滅菌15min，製成高層斜麵，冷卻後備用。

 2、挑取待檢菌的新鮮培養物，穿刺接種混合克氏雙糖鐵瓊脂斜麵。接種時先在斜麵劃線，然後再穿刺底層。

 3、將試管放入培養箱內36±1℃培養18—24h。

 4、觀察結果。觀察斜麵與底層的反應情況。

三、質量控製：

 配成的培養基為紅色，下列菌株接種後於36±1℃培養24h結果如下：

  注：“A”為產酸，“K”為產堿。

四、常見問題：

 （1）克氏雙糖鐵試驗時間為什麽要控製在18-24h？KIA時間長了會怎樣,短了會怎樣？

 答：時間短了細菌發酵不夠充分,現象不明顯。時間長了細菌發酵過度,因為KIA是利用酸堿指示劑顯色的，時間長了自然會引起一些改變而影響判斷，同時各種副反應也會造成很大影響。相對來說,時間稍微長一點兒影響不大，但不能長得太誇張。

（2）MIU試驗,為什麽大腸埃希菌培養24h之後，培養基出現了氣泡？誌賀菌的培養基就沒有？

 答：因為大腸埃希菌是產氣的,而誌賀菌不產氣。

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