一、試驗原理：
用於腸道菌計數和腸杆菌科鑒別。
蛋白腖和酵母粉提供碳氮源和微量元素；葡萄糖是可發酵的糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；膽鹽和結晶紫抑製革蘭氏陽性菌，特別抑製革蘭氏陽性杆菌和糞鏈球菌；中性紅為pH指示劑，瓊脂是培養基的凝固劑。
二、培養基配方（g/L）：
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酵母粉 |
3.0 |
|
蛋白腖 |
7.0 |
|
氯化鈉 |
5.0 |
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葡萄糖 |
10.0 |
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膽鹽 |
1.5 |
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結晶紫 |
0.002 |
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中性紅 |
0.03 |
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瓊脂 |
13.0 |
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pH 7.3±0.2 25℃ |
|
三、試驗方法：
粉體裝培養基的使用：
1.稱取本品39.5g，加熱溶解於1000ml蒸餾水中，煮沸不要超過2分鍾，冷卻至50℃左右時，傾入無菌平皿。無需高壓滅菌。
2.使用前，把製備好的平板放置室溫10-20分鍾。
3.製備質控菌液。
4. 選擇合適稀釋度的目標菌質控菌液0.1ml，均勻塗布於待測平板以及參比平板上，每一稀釋度接種兩個平板。
5．用1μL接種環取非目標菌質控菌液1環，將接種環接觸容器邊緣3次去除多餘液體，在平板表麵劃六條平行直線，同時接種兩個平板。
6. 36±1℃倒置培養基培養18-24小時，記錄實驗結果。
四、結果觀察與解釋
接種以下質控菌株，放置36±1℃需氧培養18-24小時。
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質控菌株 |
菌株編號 |
接種量(CFU) |
參比或計數培養基 |
方法 |
質控評定標準 |
其他特征 |
|
糞腸球菌 |
ATCC29212 |
/ |
/ |
半定量 |
G≤5 |
/ |
|
大腸埃希氏菌 |
ATCC8739 |
20-200 |
TSA |
定量 |
PR≥0.7 |
紅色菌落，有膽鹽沉澱環 |
|
鼠傷寒沙門氏菌 |
ATCC14028 |
20-200 |
PR≥0.7 |
紅色菌落，有膽鹽沉澱環 |
||
|
福氏誌賀氏菌 |
CMCC(B)51572 |
20-200 |
PR≥0.7 |
紅色菌落，有膽鹽沉澱環 |
圖1-2 腸道菌計數瓊脂（VRBDA）微生物質控結果
備注：a:糞腸球菌，b:大腸埃希氏菌，c:鼠傷寒沙門氏菌，d:福氏誌賀氏菌
五、注意事項
本培養基僅為細菌鑒定的一部分，需做其他補充試驗。
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