沙門菌屬是社區獲得性食源性細菌性腸炎的首要病原菌,屬腸杆菌科,革蘭陰性無芽孢杆菌,典型菌株多具有周生鞭毛、能運動、能分解葡萄糖並產氣。每年全球因食品中沙門菌汙染而引起的感染病例數以億計,在原國家衛生部辦公廳關於2012年全國食物中毒事件情況的通報中,沙門菌占食源性致病菌引起食物中毒總數的56.1%。
沙門菌屬由兩個種組成:腸道沙門菌( Senterica)和邦哥沙門菌( S bongori)。目前已知沙門菌血清型有2500多種(表4-1),其中在食品中常見的血清型有數十種。沙門菌廣泛存在於人類、動物的腸道中,常通過動物接觸、養殖動物的居宰、不當加工操作等方式汙染食品,進而導致感染社區人群。
一.操作要點與注意事項
1.使用均質袋進行預增菌培養時,應使用帶有底托的均質袋架子,防止培養過程中預增菌液泄露汙染培養箱。
2.在進行TSI培養時,應將試管口鬆開,保持管內有充足的氧氣,否則會產生過量的H2S。
3.由於三糖鐵瓊脂試驗中底部糖分解需要厭氧環境,瓊脂底部與斜麵最低點的距離應不少於4厘米。
4.如果在培養22~24小時後,BS平板上未見沙門菌可疑菌落,應再培養22~24小時,如果仍沒有可疑菌落,應挑取非典型菌落進行鑒定。
5.在培養箱中,為防止中間平皿過熱,高度不得超過6個平皿。
6.本方法移液時可使用可連接吸管的電動移液器,在使用過程中,一旦液體進入電動移液器中,應立對濾膜進行更換,以防止交叉汙染。
7.當對易產生較大顆粒的樣品(如肉類)進行檢測時,建議使用帶濾網均質袋,以方便均質後用吸管吸取勻液。
8.鑒於微量移液器移液頭較短,為控製汙染,在本方法移液過程中不應使用。
9.BS平板應製備後避光溫保存,並在24小時內使用。
二.疑問解析
問題1.是否有沙門菌均有致病力？
目前，所有已知沙門菌對人、動物二者均有致病力。
問題2.是否有沙門菌均能產生硫化氫？
絕大多數沙門菌是硫化氫陽性，但也有例外，如甲型副傷寒、豬傷寒等沙門菌為硫化氫陰性。
問題3.為什麽在沒有典型菌落時仍要挑取非典型菌落進行鑒定？
根據經驗，有3%~5%的沙門菌在選擇性分離平板上呈現非典型性菌落。
問題4.是否所有沙門菌都有動力？
的確有少量的沙門菌缺失鞭毛，在半固體上不能呈現蔓延生長。
問題5.從哪裏獲得最新的沙門菌血清分型資料？
目前，最新版沙門菌血清分型方法及血清型抗原式為WHO與法國巴斯德研究所在2007年出版（第九版），其中共計包括了2579個血清型，之後更新的血清型不在其中。
問題6. 50%甘油-BHI肉湯菌種凍存如何配置和使用？
取BHI內湯幹粉,按說明書加入1/2體積的水徹底溶解後,再加入等體積的甘油,混勻,分裝於2mL菌種凍存管中(1.5mL/管)，121℃高壓滅菌15min，-20℃儲存備用。使用時，將BHI肉湯凍存管從-20℃取出，恢複至室溫，將已鑒定完成的沙門菌用無菌棉簽從營養瓊脂平板上刮取，加入50%甘油-BHI肉湯中，混勻，用防凍記號筆標識清晰，-80℃長期保存備查。
問題7.如果在前增液或選擇增菌結束後，肉湯中未見微生物生長，是否可以終止實驗？
不可以。因為肉眼可見的細菌濃度為107CFU/mL，在此濃度下，肉眼是不能發現的。
鑒於沙門菌的廣泛存在和對社區人群健康造成的危害,我國《食品安全國家標準食品中致病菌限量》(GB29921-2013)中對多種食品中沙門菌的安全標準進行了明確要求,並規定食品中的沙門菌檢驗應按照《食品安全國家標準食品微生物學檢驗沙門氏菌檢驗)(CB47894-2016)開展。本方法對食品中可能存在的沙門菌通過前增菌、增菌、分離培養、生化裝定、血請分等過程進行檢驗。
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