生活飲用水中微生物的檢測方法

檢測依據：

GBT5750.2-2006生活飲用水標準檢驗方法水樣的采集和保存

GBT5750.12-2006生活飲用水標準檢驗方法微生物指標

本文主要包含：

1.生活飲用水中的微生物指標

2.水樣采集規則及注意事項

3.菌落總數、總大腸菌群、耐熱大腸菌群、大腸埃希氏菌的測定方法

4.對所檢測水樣的綜合分析

   生活飲用水中的微生物指標

菌落總數

     水樣在營養瓊脂上有氧環境下，37℃培養48h後，所得1ml水樣所含菌落的總數。

     檢測意義:作為一般性汙染的指標,即評價被檢樣品的微生物汙染程度和安全性。水樣菌落總數越多,說明水被微生物汙染程度越嚴重,病原微生物存在的可能性越大,但不能說明汙染的來源。  

總大腸菌群

     指一群在37℃培養24h能發酵乳糖，產酸產氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢杆菌。

     檢測意義:作為糞便汙染的指標。水樣總大腸菌群的含量,表明水被糞便汙染的程度，而且間接地表明有腸道致病菌存在的可能。

耐熱大腸菌群

     指一群在44-44.5℃培養24h能發酵乳糖，產酸產氣，需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢杆菌。我國習慣上稱之為“糞大腸菌群”。

  微生物指標常規檢驗流程圖

一、水樣采集

采樣原則：所采集的樣品具有代表性。

采樣容器:不能是新的汙染源:不吸收或吸附某些待測組分不與待測組分發生反應。保證從采樣到分析期間樣品各組分的濃度不發生改變。

微生物樣品必須按一般無菌操作的基本要求采集,並保證在運送、貯存過程中不受汙染。

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自來水水樣:先將自來水龍頭用火焰燒灼3min滅菌再開放水龍頭使水流5min(經常用水的水龍頭放水1~3min)後,采集水樣於無菌玻璃瓶,約占瓶容量80%,以便搖勻水樣。

水源水水樣:選有代表性的地點及可疑地方,一般距水麵下10-15cm采集，采樣後在水中改好蓋子，再從水中取出。

注意事項

     1.嚴格無菌操作。

     2.做好標記:采得水樣後應立即記錄水樣名稱、地點、時間等內容。

     3.從速送檢。水樣從采集到檢驗不應超過2h,在4℃下保存不應超過24h。

二、菌落總數測定

    所需培養基和試劑：營養瓊脂、9ml無菌生理鹽水管

自來水水樣檢測

操作步驟：

    1.以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL充分混勻的水樣,注入滅菌平皿中。

    2.傾注約15mL已融化井冷卻到45℃左右的營養瓊脂培養基,並立即旋搖平皿,使水與培養基充分混勻（每次檢驗時應做一平行接種,同時另用一個平隻傾注營養瓊脂養基作為空白對照）

    3.待冷卻凝固後,翻轉平皿,使底麵向上,置於36℃±1℃培養箱內培養48h,進行菌落計數,即為水樣1mL中的菌落總數。

    4.培養完成後，用眼睛直接觀察,必要時用放大鏡檢查,以防遺漏。

結果分析與報告:

    計算平均菌落數，若菌落總數(cfu/ml)當檢樣的菌落數為1~100時,按實有數報告；大於100時,采用二位有效數字報告。

    國家標準(GB5749-2006)規定生活飲用水菌落總數每毫升不得超過100個。  

水源水檢測

操作步驟：

   1.以無操作方法吸取1mL充分混勻的水,注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1:10稀釋液。

   2.吸取1:10的稀釋液1ml，注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1:100稀師液,按同法依次稀釋成1:1000,1:1000釋液等備用（如此遞增稀釋一次,必須更換一支1m滅菌管）。

   3.然後用無菌極管取稀釋的水樣和2個~3個適釋度的水樣1mL,分別注入滅菌平皿內。之後操作同自來水水樣的檢驗步驟。

結果分析與報告:

    計算平均菌落數，首先選擇平均菌落在30~300之間者進行計算。  

計算方法和報告方式：

一般水源水中菌落總數與水清潔程度的關係：

水的類別	最清潔水	清潔水	不太清潔水	不清潔水	極不清潔水
菌落總數CFU/100ML	10-100	100-1000	1000-10000	10000-100000	>100000

注意事項

    1.菌落總數測定中,應選擇合適的稀釋度進行(生活飲用水,國家標準規定每毫升不得超過100個,因此以直接吸取1毫升到平板進行培養)

    2.各稀釋管、相應半皿做好標記。包括:水樣名稱、稀釋度、時間、小組。

    3.嚴格無菌操作進行水樣稀釋時,每一稀釋度均需更換吸管。

    4.傾注時,要注意營養瓊脂的溫度。

    5.傾入瓊脂後要混勻,待瓊脂凝固後倒置培養。

三、總大腸菌群測定

      所需培養基和試劑：乳糖蛋白腖培養液、雙料乳糖蛋白腖培養液、伊紅美藍培養基

多管發酵法步驟:

    初步發酵試驗:采用乳糖蛋白培養液36℃±1℃培養24h觀察產酸產氣情況。

    平板分離:對陽性管培養物,接種於伊紅美藍培養基觀察菌落特征,並進行革蘭氏染色和鏡檢。

    複發酵證實試驗:對典型和可疑菌落,接種於乳糖蛋白腖培養液,進行複發酵證實試驗。

    結果報告(MPN):根據GB5750.12-2006所附檢索表報告結果。                                                                                 

               初發酵、複發酵試驗結果                

大腸菌群在EMB平板上的典型特征 

      大腸菌群革蘭氏染色鏡檢結果 

四、耐熱大腸菌群測定

    所需培養基和試劑：乳糖蛋白腖培養液、EC肉湯、伊紅美藍培養基

多管發酵法步驟:

    初步發酵試驗:采用乳糖蛋白培養液36℃±1℃培養24h觀察產酸產氣情況。

    耐熱培養:陽性管接種在EC肉湯管中，44.5℃培養24h觀察產酸產氣情況。

    平板培養:陽性管接種在EMB平板上，36℃±1℃培養24h。

    結果報告(MPN):根據GB5750.12-2006所附檢索表報告結果。                                                                                           

        不同細菌在EC肉湯中的生長特征

五、大腸埃希氏菌測定

    所需培養基和試劑：EC-MUG培養基                                            

多管發酵法步驟:

    耐熱培養:將總大腸菌群初發酵中產酸或產氣的管進行大腸埃希氏菌檢測，接種此類試管中的液體到EC-MUG管中，在培養箱或恒溫水浴中44.5℃培養24h。如使用恒溫水浴，在接種後30min內進行培養，使水浴液麵超過EC-MUG管的液麵。

    結果報告(MPN):將培養後的EC-MUG管在暗處用366nm紫外燈照射，如有藍色熒光，則表明水樣中含有大腸埃希氏菌。計算EC-MUG陽性管數，根據GB5750.12-2006所附檢索表報告結果。  

不同細菌在EC-MUG管中的生長特征

生活飲用水中微生物檢測方法總結  

生活飲用水標準檢驗方法——微生物指標

所需培養基匯總表

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